[发明专利]细胞周期检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种新型的细胞周期检测试剂盒及其应用。所述试剂盒至少包含磷酸化组蛋白H3检测试剂和核酸荧光染料。本发明通过引入M期细胞特殊标记以有效区分G2和M期细胞，实现对四个细胞周期的全面检测。进一步结合流式细胞术检测悬浮细胞的细胞增殖周期，从而能够准确反映出细胞增殖周期的全部信息。本发明提供的细胞周期检测方法具有操作简单、高效、试剂廉价易得等优点，可以对大规模细胞样本进行检测，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及细胞生物学领域，具体地说，涉及细胞周期检测试剂盒及其应用。

背景技术

细胞增殖是维持生命的基础，是一个非常复杂精密调控的生理过程。根据增殖过程中的核酸、蛋白质及细胞整体变化特征，将细胞的增殖周期分为G1、S、G2和M四个周期。

很多遗传病、感染性疾病以及肿瘤等疾病的发生发展都与细胞的增殖周期异常直接相关，因此细胞增殖周期的检测是判断细胞病理机制的重要手段，也是临床和科研工作中常用的实验方法。

目前国内外细胞增殖周期的检测方法主要有两类，第一类是直接用核酸试剂(如PI,DAPI,Hoechst等)染细胞DNA，根据不同细胞周期细胞DNA含量不同来对细胞周期进行分析。该方法操作简单，但实验结果分析困难，容易产生较多误差，尤其是对S和M期细胞的分析很不可靠。目前只适合用于一些药物初筛。

第二类是在第一类核酸试剂的基础上，用核苷酸类似物(如EdU)标记新合成的DNA，用以区分S期细胞。由于S期细胞可以被标记信号放大显示，因此该方法可以区分G1、S和G2M三个周期。该方法可以用于研究一些影响G1/S、S/G2周期的病理过程，但是对于G2/M周期却无法检测，难以提供细胞增殖周期的全部信息，并且对G2/M周期过渡有影响的疾病完全不能检验。

因此，亟需开发新的细胞增殖周期检测方法，以全面准确地反映细胞增殖周期的所有信息。

发明内容

本发明的目的是提供一种可实现对四个细胞周期(G1、S、G2和M)全面检测的细胞周期检测试剂盒及其应用。

本发明构思如下：通过引入M期细胞特殊标记以区分G2和M期细胞，以实现对四个细胞周期的全面检测。研究发现磷酸化组蛋白H3只在M期细胞内表达，而其他周期无表达，可将其作为M期细胞标记物。进一步优化调整细胞标记试剂和条件，结合流式细胞术检测悬浮细胞的细胞增殖周期。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种细胞周期检测试剂盒，所述试剂盒至少包含磷酸化组蛋白H3检测试剂和核酸荧光染料。

所述磷酸化组蛋白H3检测试剂可以是抗磷酸化组蛋白H3抗体，优选p-H3-AlexaFluro 647(Cell Signalling Tech,3458S)。

所述核酸荧光染料可选自DAPI、PI、Hoechst等。

所述试剂盒还包含BrdU溶液(Biolegend,423401)及其对应的荧光标记抗体溶液。

优选地，BrdU对应的荧光标记抗体为抗BrdU-FITC(Biolegend,364104)。

进一步地，所述试剂盒还包含细胞固定剂和细胞破膜剂等。

所述细胞固定剂可以是2％-4％多聚甲醛。

所述细胞破膜剂中含有Triton X-100。

第二方面，本发明提供所述试剂盒在细胞周期检测中的应用(含非诊断目的)。

第三方面，本发明提供一种细胞周期检测方法(含非诊断目的)，包括：

(1)将细胞接种到含有BrdU的细胞培养基中进行培养；

(2)收获细胞，洗涤后，用细胞固定剂固定细胞；