[发明专利]一种人生长激素的体外活性检测方法

说明书

本发明公开了一种人生长激素的体外活性检测方法，包括以下步骤：获得功能性质粒：获得序列为SEQ ID NO.1的cDNA、SEQ ID NO.2的cDNA和SEQ ID NO.3的cDNA，然后克隆至真核表达质粒pcDNAsupgt;TM/supgt;3.1(+)的两个限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ之间，分别得到质粒pCDNA3.1+flmGHR、质粒pCDNA3.1+STAT5a和pCDNA3.1+JAK2；获得质粒PGL4.52；获得检测细胞：将上述质粒按比例混合，共转染至真核细胞中得到检测细胞；活性检测：将检测细胞、被检测物和ONE‑Glosupgt;TM/supgt;检测试剂共混，根据化学发光值得到人生长激素的体外活性。

技术领域

本发明涉及人生长激素检测技术领域，尤其是涉及一种人生长激素的体外活性检测方法。

背景技术

人生长激素(Human Growth Hormone，hGH)是由脑垂体前叶后外侧嗜酸性细胞分泌的一种单一肽链的蛋白质激素，是调节人体生长代谢等多重功能的重要激素。hGH的基本功能是刺激所有机体组织的发育，增加体细胞的大小与数目，保证各器官均匀变大、骨骼增长，从而实现体型增长。如果儿童hGH分泌不足，会导致生长发育迟缓，如及时使用hGH进行合理治疗则可使患者实现健康发育。1985年Genentech上市了第一个重组 hGH(rhGH)产品，目前世界上共有约15个厂家，二十余个品牌的rhGH在售，国内rhGH 厂家5家。随着生活水平和医疗条件的提高，国内近年rhGH市场增速快于国际平均增速。

作为激素类生物制品，rhGH的生物学活性是其核心质量指标，上市产品均以rhGH的生物学活性作为剂量标准，因此rhGH的生物学活性检测在hGH的研究、开发以及产品质量放行中具有重要意义。另外在临床实践中，GH的检测常采用放射免疫分析法 (IRMA)，该方法仅是从分子结构上反映与免疫原相关的化合物的结合活性，但可能无法反映GH真实的生物活性水平。因此采用适当的活性检测方法测定患者血清中GH的生物学活性，有利于更加准确地判断患者病因，也有利于研究不同GH缺陷疾病的发病机理。

《中华人民共和国药典》(2015年版)收录有“生长激素生物测定法”，包括“去垂体大鼠体重法”和“去垂体大鼠胫骨法”，两种方法可以采用同一批大鼠同时开展，基本过程如下：取严格符合要求的大鼠，于检测前2～3周开展去垂体手术并恢复；hGH标准品和待检样品分别稀释成高低两种浓度(0.1～0.2IU/mL和0.025～0.05IU/mL)，取上述去垂体小鼠进行分组，每组8只，标准品和待测样品分别需要2组，用于分别注射上述高低浓度样品0.5mL，每日1次，连续6日。于最后一次给药24h后处死大鼠，称量并记录体重，解剖确认垂体确已去除，并取下两腿胫骨切片处理，测量胫骨骨骺板宽度。以体重和骨骺板宽度作为指标，统计计算待测样品生物学活性。

类似地，动物源的GH其生物学活性也需要通过动物实验进行分析。

上述hGH生物学活性检测方法存在时间长(3～4周)、大鼠去垂体技术难度高、对实验动物伤害大、检测结果偏差大、检测成本高等缺点，在一定程度上也限制了生长激素类产品的开发。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种可显著降低检测限的人生长激素的体外活性检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种人生长激素的体外活性检测方法，包括以下步骤：