[发明专利]一种检测甲草胺的试纸条及其应用

说明书

本发明公开了一种检测甲草胺的试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，所述反应膜上具有包被有甲草胺半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有甲草胺单克隆抗体‑胶体金标记物。本发明还提供了一种应用上述甲草胺试纸条检测农作物中甲草胺残留的方法。本发明所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

技术领域

本发明涉及一种检测甲草胺的试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测甲草胺的胶体金试纸条，其特别适用于农作物中甲草胺残留的检测。

背景技术

甲草胺是酰胺类除草剂，对禾本科杂草有较好的效果，主要用于大豆、玉米、花生、甘蔗，也可用于非砂性土壤种植的棉花、油菜、马铃薯、洋葱、辣椒、甘蓝等作物，可防治一年生杂草，能有效防除大多数禾本科杂草，但对多数双子叶和多年生杂草的防除效果差，甚至无效。甲草胺对人畜低毒，以前人们认为甲草胺没有致畸和致癌作用，但是90年代后，更多的研究认为甲草胺为致癌物，美国FDA规定：大豆、玉米的最大残留限量为0.2mg/kg；棉籽、新鲜玉米0.05mg/kg。

检测甲草胺的方法有气相色谱法、气相色谱-质谱法等。与上述方法相比，免疫化学检测法对药物检测具有快速、特异、灵敏、准确、可以批量监测、样品处理简单、能实现自动化操作等优点。而免疫化学法检测甲草胺的前提是需要具备针对甲草胺的抗体，本申请发明了甲草胺人工抗原制备方法，并将其应用于快速检测试纸条中，用时短，操作简单，成本较低，适用于基层单位大批量地检测样品。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的甲草胺残留检测试纸条。

本发明所提供的检测甲草胺残留的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)；所述反应膜上具有包被有甲草胺半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有甲草胺单克隆抗体-胶体金标记物。

所述甲草胺半抗原-载体蛋白偶联物是由甲草胺半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述甲草胺单克隆抗体是以甲草胺半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由甲草胺单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。

所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)依次粘贴在底板(7)上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：

1)制备喷涂有甲草胺单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2)制备具有包被有甲草胺半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：

1)半抗原制备：将甲草胺与氯甲基甲基醚等物质经过一系列化学反应得到甲草胺半抗原；

2)将甲草胺半抗原与载体蛋白偶联，得到甲草胺半抗原-载体蛋白偶联物；

3)用甲草胺半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到甲草胺单克隆杂交瘤细胞株；