[发明专利]一种猪血浆中蛋白质的提取纯化方法

权利要求书

1.一种猪血浆中蛋白质的提取纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将猪血浆稀释至蛋白含量为2％～5％并调节pH至6.0～8.5、离子强度至0.03～0.16，得到猪血浆溶液；

(b)在2～18℃下，向猪血浆溶液中添加乙醇至乙醇浓度为10％～12％、静置、固液分离，分别得到猪血浆白蛋白和第一上清液；

(c)在2～18℃下，在第一上清液中继续添加乙醇至乙醇浓度为15％～18％、静置、固液分离，分别得到猪血浆免疫球蛋白和第二上清液；

(d)在2～18℃下，在第二上清液中继续添加乙醇至乙醇浓度为20％～25％、静置、固液分离，分别得到猪血浆凝血酶和第三上清液；

(e)将第三上清液进行层析柱分离纯化得到纤维蛋白原溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中，稀释采用的稀释液为磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固液分离温度控制在3～5℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(e)中，层析柱分离纯化包括：

将DEAF-Sepharose Fast Flow凝胶室温放置达到温度平衡后装柱，并采用缓冲液进行洗脱平衡，然后，将第三上清液上样于平衡好的层析柱，再采用缓冲液进行洗脱，收集纤维蛋白原溶液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脱流速控制在每小时4倍柱体积，温度控制在2～8℃，洗柱8～10倍柱体积。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述缓冲液为pH6.0～6.5的12mM的磷酸盐缓冲液、35mM的醋酸盐缓冲液或22mM的柠檬酸盐缓冲液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(e)中，还包括：

将纤维蛋白原溶液进行超滤浓缩、巴士消毒、除菌、冷冻干燥，得到纤维蛋白原冻干粉。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述纤维蛋白原冻干粉中含水量不高于3％。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述巴士消毒包括：

将超滤浓缩后的溶液稀释到蛋白含量为1.5％～2.5％并调节pH值至6.4～6.8，然后，加入甘氨酸和麦芽糖，随后在60±0.5℃下保温10h。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述甘氨酸的终浓度为45～55mM，麦芽糖的终浓度为25％～35％。