[发明专利]一种猪血浆中蛋白质的提取纯化方法

说明书

本发明公开了一种猪血浆中蛋白质的提取纯化方法包括将猪血浆稀释至蛋白含量为2％～5％并调节pH至6.0～8.5、离子强度至0.03～0.16，得到猪血浆溶液；向猪血浆溶液中添加乙醇、静置、固液分离，分别得到猪血浆白蛋白和第一上清液；在第一上清液中继续添加乙醇、静置、固液分离，分别得到猪血浆免疫球蛋白和第二上清液；在第二上清液中继续添加乙醇、静置、固液分离，分别得到猪血浆凝血酶和第三上清液；将第三上清液进行层析柱分离纯化得到纤维蛋白原溶液；该方法通过对猪血浆中蛋白含量、pH、离子强度以及乙醇终浓度的限定，能够实现对猪血浆中白蛋白、免疫球蛋白、凝血酶以及纤维蛋白原的提取，而且该提取方法提取效率较高，且提取得到的蛋白质具有优异的纯度。

技术领域

本发明涉及蛋白质提取技术领域，具体涉及一种猪血浆中蛋白质的提取纯化方法。

背景技术

猪血通常是屠宰场的废料被废弃或者作为普通猪血食品进入农贸市场消费。猪血由有形的血细胞组分和无形的血浆成分组成。为提高猪血的综合利用价值，有大量研究报道用猪血提取各类血红素蛋白。CN10443B一种猪血的综合利用方法，主要是提取猪血液的红色血细胞成分。然而提取纯化猪血浆蛋白质成分的报道较少。

猪血浆中含有多种具有营养价值以及特殊生物活性的蛋白质和酶，包括白蛋白、免疫球蛋白、纤维蛋白原等。其中白蛋白具有扩张血容量、增强机体营养的作用，猪免疫球蛋白具有免疫活性、提高生命体免疫性的功效，猪纤维蛋白原具有生物亲和粘附性、能促进伤口愈合，可用于外科手术的伤口缝合、美容整形的无疤痕手术等；因此，从猪血浆中分离纯化各种活性蛋白质，能提高猪血浆的综合利用水平、提供人类医疗用品，对于创造社会经济价值、促进人类健康具有十分重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪血浆中蛋白质的提取纯化方法，该方法能够分别提取猪血浆中各蛋白质组分，而且各蛋白质组分的提取率、纯度较高。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明第一方面提供一种猪血浆中蛋白质的提取纯化方法，所述提取纯化方法包括如下步骤：

(a)将猪血浆稀释至蛋白含量为2％～5％并调节pH至6.0～8.5、离子强度至0.03～0.16，得到猪血浆溶液；

(b)在2～18℃下，向猪血浆溶液中添加乙醇至乙醇浓度为10％～12％、静置、固液分离，分别得到猪血浆白蛋白和第一上清液；

(c)在2～18℃下，在第一上清液中继续添加乙醇至乙醇浓度为15％～18％、静置、固液分离，分别得到猪血浆免疫球蛋白和第二上清液；

(d)在2～18℃下，在第二上清液中继续添加乙醇至乙醇浓度为20％～25％、静置、固液分离，分别得到猪血浆凝血酶和第三上清液；

(e)将第三上清液进行层析柱分离纯化得到纤维蛋白原溶液。

本发明上述提取纯化方法通过对猪血浆中蛋白含量、pH、离子强度以及乙醇终浓度的限定，能够实现对猪血浆中白蛋白、免疫球蛋白、凝血酶以及纤维蛋白原的提取，而且该提取方法提取效率较高，且提取得到的蛋白质具有优异的纯度。

在本发明中对猪血浆的来源不作严格限制，例如，可以通过本领域的常规方法制得；优选地，猪血浆通过如下方法制得：

将健康新鲜猪血加柠檬酸钠或EDTA钠盐作为抗凝剂，低温2-8度，离心分离去除血细胞，得到猪血浆，其中，抗凝剂为3％～8％的钠盐溶液，抗凝剂加量为猪血体积的5％～15％。

优选地，所述步骤(a)中，稀释采用的稀释液为磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液。

优选地，所述固液分离温度控制在3～5℃。

优选地，所述步骤(e)中，层析柱分离纯化包括：