[发明专利]一种尼卡巴嗪检测试剂盒及其用途

说明书

本发明提供了一种尼卡巴嗪检测试剂盒，包括96孔酶标板、酶标记物、尼卡巴嗪标识物标准品、20×浓缩洗涤液、20×浓缩复溶液、底物A液、底物B液、终止液，所述96孔酶标板上包被有尼巴卡嗪半抗原‑载体蛋白，所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的尼卡巴嗪特异性抗体。本发明还提供了尼卡巴嗪检测试剂盒在检测鸡肉样本中的应用。本发明尼卡巴嗪检测试剂盒采用一步法检尼卡巴嗪标识物，检测灵敏度高，检测结果的准确度和精密度均较好，且本发明检测试剂盒本身结构简单、使用方便、便携性好、对检测人员要求不高，适于现场大批量样本的快速检测。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种尼卡巴嗪酶联免疫快速检测试剂盒及其用途。

背景技术

尼卡巴嗪又名球虫净、双硝基脲二嘧啶醇，是由二硝基均二苯脲(DNC)和羟基二甲基嘧啶(HDP)组成的1:1复合物，是一种广谱、高效、性能稳定的饲料添加剂。尼卡巴嗪用于预防鸡和火鸡球虫病。尼卡巴嗪虽是由DNC和HDP两种成分组成的复合物，但由于复合物中的HDP成分在动物体内可迅速经尿排出体外,而抗球虫活性成分DNC通过粪便排泄较缓慢，因此国际上将二硝基均二苯脲(DNC)规定为尼卡巴嗪残留标识物。

目前尼卡巴嗪应用非常广泛,然而饲喂后在家禽的肌肉及其他组织中会造成不同程度的残留,危害人类生命健康。我国规定尼卡巴嗪在鸡组织中的残留标识物为DNC，在鸡肌肉、皮、脂肪、肝脏、肾脏中的残留限量为200μg/kg。

目前，尼卡巴嗪残留标识物的检测方法主要有仪器分析法和免疫学分析法。仪器分析法，前处理程序繁琐，测定时间长，仪器成本高，对检测人员要求高，不能满足尼卡巴嗪的实时快速检测。免疫分析法，主要是以酶为反应介质的快速筛选方法，以抗原抗体为核心检测试剂。免疫分析法具有检测简便、快速，适应于大量样本的检测。申请公布号为CN106771137的发明专利公开的检测尼卡巴嗪的酶联免疫试剂盒及应用，公开了一种酶联免疫试剂盒，其具有包被尼卡巴嗪偶联抗原的酶标板、尼卡巴嗪单克隆抗体、酶标记物抗抗体、尼卡巴嗪标准品溶液、底物显色液、终止液，现有技术酶联免疫试剂盒检测步骤仍然比较繁琐，检测反应所需时间较长，且检测灵敏度仍不高。

发明内容

为克服现有技术的缺点，本发明的目的是提供一种检测灵敏度高，现场检测反应时间短，检测简便的尼卡巴嗪检测试剂盒，本发明检测试剂盒精密度和准确度均较高。

本发明技术方案：

本发明尼卡巴嗪检测试剂盒包括96孔酶标板、酶标记物、尼卡巴嗪标识物标准品、20×浓缩洗涤液、20×浓缩复溶液、底物A液、底物B液、终止液，其中96孔酶标板上包被有尼卡巴嗪半抗原-载体蛋白偶联物，酶标记物为辣根过氧化物酶标记的尼卡巴嗪特异性抗体。

其中，尼卡巴嗪标识物标准品为0μg/L，0.025μg/L，0.075μg/L，0.225μg/L，0.675μg/L。

其中，20×浓缩洗涤液的成分是含1％聚乙二醇400单油酸酯，0.1mol/L MES缓冲液，pH6.0。

其中，20×浓缩复溶液的成分是含50％DMF，0.01mol/L碳酸盐缓冲液，pH 9.0。

其中，底物A液为过氧化氢，底物B液为TMB。

其中，终止液为2mol/L H₂SO₄。

进一步地，尼卡巴嗪半抗原结构式为

由以下步骤制备得到，制备路线图图1所示。

1)产物Ⅰ的合成