[发明专利]一种猫杯状病毒VP1-VP2重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种猫杯状病毒VP1‑VP2重组蛋白，属于动物病毒抗体检测领域。所述重组蛋白包括SEQ ID NO.1所示氨基酸序列或由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。本发明还进一步公开了所述重组蛋白的基因，包含所述基因的载体和宿主细胞，以及所述重组蛋白的其制备方法和在检测猫杯状病毒抗体中应用。利用本发明的重组蛋白检测猫杯状病毒，方便快捷，灵敏度高，与其他病原体无交叉反应，特异性强，具有巨大的临床意义和和广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于动物病毒抗体检测领域，具体地，涉及一种猫杯状病毒VP1-VP2重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

猫杯状病毒(Feline Calicivirus，Fcv)是猫科动物的常见病原，可通过口、鼻等途径感染，主要在口腔和呼吸道组织中增殖，FCV的单独感染或与其他病原的混合感染可引起猫的上呼吸道和口腔病变，临床见打喷嚏、眼鼻部出血、结膜炎、口炎、牙龈炎、口腔溃疡，严重者还会发生肺炎、跛行、流产、慢性胃肠炎、皮肤水肿及溃疡等。猫杯状病毒感染是猫的多发病，发病率高，死亡率低。FCV与猫疱疹病毒等感染引起的症状非常相似，也可引起很多复杂的非典型症状，单从临床症状难以确诊病原，还需结合实验室诊断确诊。目前针对FCV的实验室诊断包括病毒分离、核酸检测和血清学检测。

利用病毒分离的检测方法会变得困难。虽然病毒分离是最为可靠的检测方法，但其耗时长。而免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)技术等方法需要使用指定的仪器设备、具备相应的试验条件和技能，难以在基层推广。胶体金标记免疫分析法是近年兴起并快速发展的一种新型分析技术，其特点是快捷简便、成本低、无污染，且操作简单，无需操作人员具备专业知识，与传统方法相比更为适合现场检测。与ELISA相比，具有显色时间短、无需昂贵仪器等优点，具有广阔的市场前景和应用价值。

通常大多数猫在感染猫疱疹病毒三周时体内抗体水平最高，随后机体内抗体水平快速下降，因此，利用血清学试验检测FCV感染急性期和康复之后的双份血清的中和抗体效价，具有回顾性诊断意义。

然而，目前针对血清学试验检测FCV感染的检测方法和工具仍具有较大局限性。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种猫杯状病毒VP1-VP2重组蛋白，包括SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。

VP1和VP2来源于FCV病毒的FCV结构蛋白，即衣壳蛋白。其包括ORF2(Open ReadingFrame，ORF，开放阅读框)编码的VP1和ORF3编码的VP2，VP2分为A～F 6个区域，A区位于氨基末端1-120aa，B区位于121～396aa，C区位于397～401aa，D区位于402～425aa，为高度保守区，E区位于426～520aa，F区位于521～668aa，位于衣壳蛋白高度保守的羧基端，该区位于病毒的表面。

在本发明的一些实施方案中，优选地，所述重组蛋白由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。

本发明的第二方面提供一种编码本发明第一方面所述重组蛋白的基因，其包括SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

该基因序列是为了在大肠杆菌中表达所述重组蛋白，根据大肠杆菌对密码子的偏好性，对密码子进行了优化。

本发明的第三方面提供一种表达载体，其包括本发明第二方面所述的基因。

在本发明的一些实施方案中，所述表达载体为pET30a，其具有卡那霉素抗性，表达的融合蛋白具有组氨酸(His)标签。

本发明的第四方面提供一种宿主细胞，其含有本发明第三方面所述的表达载体。

进一步地，所述宿主细胞为真核宿主细胞或原核宿主细胞。