[发明专利]一种基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）自增强电化学发光材料SiO₂@Ru-NGQDs的制备：

首先，将一定量的三联吡啶钌水溶液与石墨烯量子点水溶液混合后，在黑暗环境中进行第一次搅拌，加入环己烷、曲拉通和己醇，进行第二次搅拌，在搅拌条件下加入硅酸四乙酯、氨水，然后再进行密封搅拌，所得混合溶液加入丙酮后进行离心，所得固体分别用超纯水、乙醇清洗，得到材料记为SiO₂@Ru-NGQDs，将所得材料烘干称量，分散在超纯水中，得到SiO₂@Ru-NGQDs水溶液，备用；

（2）将玻碳电极依次用不同粒径的三氧化二铝粉末打磨，分别在乙醇和水中超声30 s后于空气中干燥，得到处理后的玻碳电极；

（3）将步骤（1）制备的自增强电化学发光材料SiO₂@Ru-NGQDs水溶液修饰到步骤（2）处理后的玻碳电极表面，用Nafion膜固定，修饰后的玻碳电极记为SiO₂@Ru-NGQD/GCE；

（4）将金纳米粒子修饰在步骤（3）所制得的SiO₂@Ru-NGQD/GCE材料的电极表面，在室温下自然晾干，修饰后的材料记为AuNPs/SiO₂@Ru-NGQD/GCE；

（5）取被巯基修饰的适配体互补链，记为cDNA；将cDNA固定在步骤（4）得到的AuNPs/SiO₂@Ru-NGQD/GCE材料的电极表面，并进行孵育，孵育后的材料记为cDNA/AuNPs/SiO₂@Ru-NGQD/GCE；

（6）二茂铁标记的AFB1适配体，记为Fc-apt；将Fc-apt修饰在步骤（5）中cDNA/AuNPs/SiO₂@Ru-NGQD/GCE材料的电极表面，孵育后即得到基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器，记为Fc-apt/cDNA/AuNPs/SiO₂@Ru-NGQD/GCE。

2. 根据权利要求1所述的基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述三联吡啶钌水溶液的浓度为10 mM，石墨烯量子点水溶液的浓度为10 mg·mL^-1；所述三联吡啶钌水溶液与石墨烯量子点水溶液的体积比为1:5；所述三联吡啶钌水溶液、环己烷、曲拉通、己醇、硅酸四乙酯和氨水的用量比为170 µL:7.5mL:1.77 mL:1.8 mL:100 µL:60 µL；所述离心的转速为8000 rpm，时间为10~15 min。

3. 根据权利要求1所述的基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述第一次搅拌的时间为12 ~14 h；所述第二次搅拌的时间为30~40min；所述密封搅拌的时间为22~24h；所述混合溶液与丙酮的体积比为1:2；所述SiO₂@Ru-NGQDs水溶液的浓度为8 mg/mL-14 mg/mL。

4. 根据权利要求1所述的基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述玻碳电极的直径d=3 mm；所用的三氧化二铝粉末的粒径依次为0.3 µm、0.05 µm。

5. 根据权利要求1所述的基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述SiO₂@Ru-NGQDs水溶液的用量为4~6 µL。

6. 根据权利要求1所述的基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，AuNPs用量为5~7 µL。

7. 根据权利要求1所述的基于Fc-apt放大电化学发光信号的双输出模式传感器的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述cDNA用量为6~8µL，浓度为5 µM；所述孵育的温度为4℃，孵育时间为12~14 h。