[发明专利]肺癌诊断的特征物及其筛选方法和应用

权利要求书

1.肺癌诊断特征物，包括呼出气体中的挥发性有机物和含氧挥发性有机物。

2.根据权利要求1所述的肺癌诊断特征物，其特征在于，所述挥发性有机物包括甲基丙烯酸甲酯、四氢呋喃、2-己酮、四氯乙烯、1-戊烯、丁二烯、正己烷、1,2,3-三甲基苯、异丙苯、氯代甲苯、1,1,1-三氯乙烷、1,2,4-三甲基苯、对-二乙基苯、丙烯、3-甲基庚烷、邻二氯苯、乙酸乙烯酯、顺-1,3-二氯-1-丙烯和乙烯中的一种或几种；所述含氧挥发性有机物包括甲醛、2-丁酮、环己酮和乙醛中的一种或几种。

3.检测权利要求1所述肺癌诊断特征物的试剂在制备肺癌诊断试剂盒中的应用。

4.一种筛选权利要求1所述肺癌诊断特征物的方法，包括以下步骤：

1)分别采集肺癌患者和健康人的第一呼出气体，分别采用热解析气相色谱和质谱联用的方法分析所述第一呼出气体中挥发性有机物的种类及含量，得到患病挥发性有机物文库和健康挥发性有机物文库；

2)分别采集肺癌患者和健康人的第二呼出气体，分别采用2,4-二硝基苯肼衍生小柱对所述第二呼出气体进行富集、洗脱，得到富集样品，分别采用超高液相色谱和质谱联用的方法分析所述富集样品中含氧挥发性有机物的种类及含量，得到患病含氧挥发性有机物文库和健康含氧挥发性有机物文库；

3)采用主成分能分析和正交偏最小二乘法模型分别分析患病挥发性有机物文库和健康挥发性有机物文库中的差异性，通过变量投影重要性值筛选对患病文库和健康文库之间挥发性有机物差异贡献较大的挥发性有机物，其中变量投影重要性值1.0的挥发性有机物为肺癌诊断挥发性有机物特征物；变量投影重要性值1.0的含氧挥发性有机物为肺癌诊断含氧挥发性有机物特征物；

所述步骤1)和步骤2)之间没有时间顺序限制。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述采集肺癌患者和健康人的第一呼出气体的装置包括以下组件：吹嘴、Nafion管和苏玛罐；所述吹嘴通过Nafion管和苏玛罐连接。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)中采集肺癌患者和健康人的第二呼出气体的装置包括连接有吹嘴的Tedlar采样袋。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述富集采用的装置包括以下组件：脱臭氧小柱、2,4-二硝基苯肼衍生小柱和空气采样泵；所述Tedlar采样袋依次和脱臭氧小柱、2,4-二硝基苯肼衍生小柱、空气采样泵连接。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述热解析气相色谱和质谱联用的方法的色谱条件为：采用双色谱系统，所述双色谱系统包括色谱柱1和色谱柱2；

色谱柱1：将前进样口与质谱连接，恒流1mL/min，所述色谱柱1的规格为：DB-624UltraInert，30m×250μm×1.4μm；所述前进样口的温度为200℃，载气为He，分流比为15:1，分流流量15mL/min；色谱柱2：将后进样口与FID检测器连接，恒流5mL/min，所述色谱柱2的规格为：HP-Plot Al₂O₃ S，15m×530μm×1.5μm；所述后进样口的温度为200℃，载气为N₂，分流比为10：1，分流流量为50mL/min；柱箱升温程序：初温35℃保持1min，以4℃/min的速度升至110℃后，即刻以10℃/min的速度升至190℃保持1min，分析结束，总分析时间为28.75min；所述FID检测器的加热器的温度为250℃，空气流量为350mL/min，氢气燃气流量为35mL/min，尾吹气流量为25mL/min；

所述热解析气相色谱和质谱联用的方法的色谱条件为：离子源温度为180℃，四级杆温度为150℃，采集模式为选择离子扫描，SEM电压为1050～1200V。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)所述超高液相色谱-质谱联用分析中超高液相色谱的条件包括：使用超高效液相色谱系统；色谱柱为C18柱，规格为：100mm×2.1mm，1.7μm particle size；所述C18柱达到平衡的温度为30℃，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分含量为0.01％的甲酸水溶液，流速为0.4mL/min；梯度淋洗程序：洗脱液B从体积百分含量为50％开始5min内升至70％，再2min升至100％，平衡3min后0.2min内降至50％，平衡时间为3.8min，总运行时间为14min，进样量为2μL；

所述超高液相色谱和质谱联用的方法的质谱条件为：毛细管电压为3.0kV、萃取器电压为2V、源温度为120℃、脱溶剂温度为350℃、氮气流速为80L/h、脱氮气体流量为600L/h；在碰撞单元中，以氩气作为碰撞气体，碰撞诱导离解的压力为4～103mbar。