[发明专利]COVID-19冠状病毒的假病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种DNA片段b，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.含权利要求1所述DNA片段b的重组载体，其特征在于，将权利要求1所述DNA片段b经优化后插入真核细胞表达载体中得到。

3.一种COVID-19冠状病毒的假病毒，其特征在于，是由COVID-19病毒的膜蛋白SARS-CoV-2 S glycoprotein参与到带有报告基因的缺损型病毒基因组的包装中得到的COVID-19冠状病毒的假病毒颗粒；其中：

所述报告基因选自绿色荧光蛋白或萤光素酶；

所述缺损型病毒基因组或其一部分来源于包括VSV、HIV、SARS的病毒，且所述缺损型病毒基因组中所包含的一个或多个结构基因可以去除或者受到调控而失活；

所述COVID-19冠状病毒的假病毒颗粒可以在带有或不带有报告基因序列的情况下包括一段或一段以上编码生物活性物质的外源序列。

4.权利要求3所述COVID-19冠状病毒的假病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)质粒一的制备：将COVID-19病毒的膜蛋白SARS-CoV-2 S glycoprotein如SEQ IDNO:1所示的DNA片段a插入含Flag标签的真核细胞表达载体中得到；

(2)质粒二的制备：将COVID-19病毒的膜蛋白SARS-CoV-2 S glycoprotein如权利要求1中SEQ ID NO:2所示的DNA片段b经优化后插入真核细胞表达载体中得到；

(3)质粒三的制备：将一病毒基因组中的囊膜蛋白基因去除并缺陷结构基因Pol和Gag，使该病毒基因组带有所述报告基因；

(4)用聚醚酰亚胺将上述质粒一、质粒二分别与质粒三、慢病毒包装质粒通过三质粒慢病毒包装系统转染到包装细胞系HEK293T中，48-72小时后收集细胞上清，提取并纯化得到COVID-19冠状病毒的假病毒颗粒。

5.根据权利要求4所述COVID-19冠状病毒的假病毒的制备方法，其特征在于，所述慢病毒包装质粒为psPAX2质粒，和/或

所述真核细胞表达载体为pCMV3质粒。

6.权利要求4所述COVID-19冠状病毒的假病毒在COVID-19中和抗体研究或药物筛选研究中的应用。

7.一种COVID-19冠状病毒的假病毒细胞模型，其特征在于，将权利要求4所述COVID-19冠状病毒的假病毒感染293T-hACE2细胞。

8.权利要求7所述COVID-19冠状病毒的假病毒细胞模型在筛选抑制COVID-19进入细胞抑制剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，通过检查细胞内表达缺损型病毒基因组所携带的报告基因的表达量定量判断上述COVID-19冠状病毒的假病毒的感染效率。

10.一种COVID-19冠状病毒的假病毒颗粒定量的方法，其特征在于，以anti-RBD(SinoBiological，40592-MM57)铺板、anti-S1-biotin(Sino Biological，40591-MM43)结合的夹心ELISA法对权利要求4制备得到的COVID-19冠状病毒的假病毒颗粒包装培养液中的S蛋白含量进行定量。