[发明专利]COVID-19冠状病毒的假病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了COVID‑19冠状病毒的假病毒及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。该假病毒由COVID‑19膜蛋白参与到带有报告基因的缺损型病毒基因组的包装中，可在带有或不带有报告基因序列的情况下包括一段或一段以上编码生物活性物质的外源序列，报告基因选自绿色荧光蛋白或萤光素酶，缺损型病毒基因组或其一部分来源于VSV、HIV、SARS以及其它病毒，且其所包含的一个或多个结构基因可以去除或者受到调控而失活。本发明中假病毒可最大程度降低病毒研究的风险，还可用于筛选抗病毒药物、测定感染者体内中和抗体的效价、寻找COVID‑19冠状病毒表面抗原上中和抗体结合的表位以及评价疫苗免疫效果。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及COVID-19冠状病毒的假病毒及其制备方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)，简称“新冠肺炎”，世界卫生组织命名为“2019冠状病毒病”。冠状病毒(CoV)是一个大型病毒家族，迄今引起人群感染暴发主要是SARS-CoV、MERS-CoV以及SARS-CoV-2，其中SARS-CoV-2(又称2019-nCoV)，是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。该病毒为第七个可以感染人的冠状病毒，人感染2019-nCoV的潜伏期一般为1-14天，感染2019-nCoV后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等，在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡，具有高度传染性且病死率较高。为了研究能够抑制该病毒进入细胞的药物，直接采用2019-nCoV开展研究具有相当大的危险性，且需要苛刻的实验条件。

假病毒不具有复制能力，不会引起2019-nCoV导致的特异性的细胞病变，可以最大程度降低SARS病毒研究过程中的各种风险。另外，由于假病毒的亲噬性和感染过程与真病毒相同，因此可以模拟病毒感染的早期过程，而且假病毒内携带有报告基因，可以方便快速地进行各种检测和分析，不仅可以用来研究病毒与宿主细胞的关系和细胞表面受体，还可以用于筛选抗病毒药物、测定感染者体内中和抗体的效价、寻找2019-nCoV病毒表面抗原上中和抗体结合的表位，评价疫苗免疫的效果。因此，制备2019-nCoV的假病毒并建立安全、可靠、高效的体外研究2019-nCoV侵染宿主细胞的感染模型是研究传染病病毒安全有效的手段。

发明内容

本发明的第一目的是，提供一种DNA片段b，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明的第二目的是，提供含上述DNA片段b的重组载体，将上述DNA片段b经优化后插入真核细胞表达载体中得到。

本发明的第三目的是，提供一种COVID-19冠状病毒的假病毒，是由COVID-19病毒的膜蛋白SARS-CoV-2 S glycoprotein参与到带有报告基因的缺损型病毒基因组的包装中得到的COVID-19冠状病毒的假病毒颗粒；其中：

所述报告基因选自绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶(luciferase)；

所述缺损型病毒基因组或其一部分来源于VSV、HIV、SARS以及其它病毒，且所述缺损型病毒基因组中所包含的一个或多个结构基因可以去除或者受到调控而失活；

所述COVID-19冠状病毒的假病毒颗粒可以在带有或不带有报告基因序列的情况下包括一段或一段以上编码生物活性物质的外源序列。

本发明的第四目的是，提供上述COVID-19冠状病毒的假病毒的制备方法，包括：

(1)质粒一的制备：将COVID-19病毒的膜蛋白SARS-CoV-2 S glycoprotein如SEQID NO:1所示的DNA片段a插入含Flag标签的真核细胞表达载体中得到；