[发明专利]一种脱细胞真皮基质材料及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种脱细胞真皮基质材料及其制备方法和应用。所述方法为：真皮原料的预处理；病毒灭活处理：在超声波清洗机中将真皮原料用碱溶液浸泡处理，然后用纯化水洗净；在超声波清洗机中用酸溶液对病毒灭活处理的材料进行脱细胞处理；更换酸溶液后重复脱细胞处理步骤1～5次，得到脱细胞处理材料；在超声波清洗机中依次用磷酸盐缓冲溶液和纯化水对脱细胞处理材料进行清洗，得到脱细胞真皮组织；将脱细胞真皮组织进行冷冻干燥；对材料依次进行裁剪和包装，采用环氧乙烷灭菌，制得脱细胞真皮基质材料。本发明降低了产品的细胞毒性风险，能更好的保留材料的三维结构与胶原蛋白，避免了酶残留导致的免疫原性，更有利于保持材料良好的机械性能。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种脱细胞真皮基质材料及其制备方法和应用。

背景技术

脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix ADM)是用物理、化学等方法将人或动物皮肤中的表皮层及细胞成分彻底去除仅保留真皮中含胶原网架的细胞外基质。脱细胞真皮基质由于完全没有了细胞成分和Ⅰ、Ⅱ型细胞相容性抗原的主要免疫活性，故一般不会诱发排斥反应。但脱细胞真皮基质保留有正常胶原的三维结构和真皮中含胶原支架的细胞外基质能为组织细胞的再生提供一个良好的支架结构，具有创面覆盖、组织缺损填充、引导组织再生和支架等作用。

根据来源的不同脱细胞真皮基质分为异体脱细胞真皮基质(来源主要为尸体皮)和异种脱细胞真皮基质(来源为动物皮以猪皮和牛皮为主)两种。制备过程都是尽可能的去除具有抗原性的细胞(表皮细胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中血管内皮细胞、成纤维细胞等)，保留完整的胶原纤维成分和组织基本结构。早期人们利用反复冻融法、胰酶消化法等制备ADM，但由于这些方法不能完全去除真皮内细胞成分，导致ADM移植后引起宿主强烈的排异反应，而且制备过程也过于复杂，因而并未广泛开展。目前ADM的制备方法主要有DispaseⅡ-Triton法、高渗盐-SDS法、高渗盐-酶消化法、NaOH销蚀法等。

中国专利申请CN 104941008 A公开了一种引导组织再生膜的制备方法及其应用；该发明的方法包括以下步骤：(1)使用表面活性剂溶液浸泡处理离体动物的皮肤；(2)使用碱溶液浸泡处理步骤(1)的产物；(3)使用过氧化物溶液浸泡处理步骤(2)的产物；(4)使用辐照保护试剂溶液浸泡处理步骤(3)的产物；(5)使用缓冲液浸泡处理步骤(4)的产物；(6)将步骤(5)产物依次进行冷冻干燥和辐照灭菌，即得到所述引导组织再生膜。中国专利申请CN109364298A公开了一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，其特点是将动物皮去肉去毛后取断层皮片，经脱脂、脱毛、病毒灭活、脱细胞、交联改性、清洗保湿、包装和辐照灭菌工艺得到的脱细胞真皮基质。然而，在上述的脱细胞真皮基质材料的制备方法中，尚存在以下不足：①生产工艺繁琐，不利于大规模生产线的建立；②都使用了离子型或非离子型表面活性剂，处理工程中材料的三维空间结构与胶原蛋白会相应的受到损伤，使产品的力学性能下降，而且表面活性剂本身具有细胞毒性，在去除过程中往往会有残留，增加了产品的细胞毒性风险；③各种化学试剂处理时间长，容易造成材料的胶原变性、蛋白裂解；④使用生物酶时较短的处理时间不能完全去除细胞，而较长的处理时间会导致胶原蛋白和弹性蛋白含量下降，进而导致基质的机械强度下降；⑤在最终灭菌时采用了⁶⁰Co辐照灭菌，高剂量的辐照对灭菌、灭活病毒是有利的，但对胶原类产品而言，高剂量会导致胶原变性及胶原链状结构的破裂，导致产品力学性能下降、降解过快、热变温度降低等，使产品性能变差；部分工艺虽然增加了产品辐照保护环节，却同时增加了工艺的复杂性，更多试剂的添加使用也导致产品污染风险增大。

发明内容

为了解决现有技术中存在的一个或者多个技术问题，本发明提供了一种脱细胞真皮基质材料及其制备方法和应用。本发明方法降低了产品的细胞毒性风险，脱细胞效果好，能更好的保留材料的三维结构与胶原蛋白，避免了酶残留导致的免疫原性，更有利于保持材料良好的机械性能。

本发明在第一方面提供了一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，所述方法包括如下步骤：