[发明专利]新月弯孢霉甾体11β-羟化酶CYP5103B6突变体构建及其应用在审
| 申请号： | 202011281730.5 | 申请日： | 2020-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN112608909A | 公开（公告）日： | 2021-04-06 |
| 发明（设计）人： | 刘晓光;李金红;路福平 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/81;C12P33/06;C12R1/865 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300457 天津市经济*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 新月 弯孢霉甾体 11 羟化酶 cyp5103b6 突变体 构建 及其 应用 | ||
1.C11β-羟化酶基因突变体L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7其特征在于，所述突变体的氨基酸序列是在如SEQ ID NO：1所示的序列基础上进行突变，即突变体L1的291位氨基酸由原来的苏氨酸(ACC)突变成亮氨酸密码(TAC)；突变体L2的365位氨基酸由原来的甲硫氨酸(ATG)突变成丙氨酸密码(GCG)；突变体L3的372位氨基酸由原来的丙氨酸(GCC)突变成苯丙氨酸密码(TTC)；突变体L4的291位、365位氨基酸共同突变，即T291Y/M365A；突变体L5的291位、372位氨基酸共同突变，即T291Y/A372F；突变体L6的365位、372位氨基酸共同突变，即M365A/A372F；突变体L7的291位、365位、372位氨基酸共同突变，即T291Y/M365A/A372F。
2.权利要求1所述的C11β-羟化酶基因突变体L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7其特征在于，用于工业转化11-脱氧皮质醇生产氢化可的松。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，C11β-羟化酶基因突变体L6、L7转化甾体11-脱氧皮质醇时羟化特异性提高，副产物明显减少。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，重组表达载体或重组酿酒酵母宿主菌表达C11β-羟化酶突变体的应用。
5.一种高效制备氢化可的松的方法，其特征在于，利用权利要求4所述的重组酿酒酵母，发酵转化底物11-脱氧皮质醇并从发酵液萃取产物氢化可的松。
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