[发明专利]引物探针组合、脑炎病毒检测试剂盒及其应用

说明书

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种引物探针组合、检测试剂盒及其应用。本发明通过设计第一类Y引物和第二类Y引物，且第一类Y引物可以与乙型脑炎病毒的特异性引物部分互补，第二类Y引物可以与圣路易斯脑炎病毒的特异性引物部分互补，形成“Y”型结构，用于阻止非特异性延伸反应的启动，以避免因乙型脑炎病毒和圣路易斯脑炎病毒基因组序列相似性较高而导致的检测特异性不足的问题，从而提高乙型脑炎病毒和/或圣路易斯脑炎病毒检测过程中的特异性和准确性，具有良好的应用前景和市场价值。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种引物探针组合，一种脑炎病毒检测试剂盒及其应用。

背景技术

乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)属黄病毒科黄病毒属，为单正链RNA病毒，圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis Virus，SLEV)属黄病毒科黄病毒属，有包膜，基因组为单股正链RNA。

目前，国内外对乙型脑炎病毒和圣路易斯脑炎病毒的检测方法主要是血清学试验、病毒培养和PCR。其中，血清学试验、病毒培养具有灵敏度低、免疫交叉反应以及周期长等缺点；常规的多重实时荧光PCR技术是将PCR技术和多色荧光标记探针相结合的技术，可以在同一个PCR反应管中对多个病毒同时进行快速扩增，大大提高了检测效率。虽然该方法具有快速、灵敏、自动化程度高等特点，但是对于属间相似性高的病原体，如乙型脑炎病毒和圣路易斯脑炎病毒，也存在特异性不足的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种引物探针组合，一种脑炎病毒检测试剂盒及其应用，旨在解决现有乙型脑炎病毒和圣路易斯脑炎病毒检测过程中存在的特异性和准确性较低的技术问题。

为了实现上述发明目的，本发明一方面，提供了一种引物探针组合，其包括乙型脑炎病毒引物探针组和圣路易斯脑炎病毒引物探针组，所述乙型脑炎病毒引物探针组包括乙型脑炎病毒特异性引物、第一类Y引物和第一类荧光探针，所述第一类Y引物包括第一类第一Y引物、第一类第二Y引物中的至少一种；所述圣路易斯脑炎病毒引物探针组包括圣路易斯脑炎病毒特异性引物、第二类Y引物和第二类荧光探针，所述第二类Y引物包括第二类第一Y引物、第二类第二Y引物中的至少一种；

其中，所述乙型脑炎病毒特异性引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列经缺失、插入或替换所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第一类第一Y引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列经缺失、插入或替换所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第一类第二Y引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列经缺失、插入或替换所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第一类荧光探针的核苷酸序列为SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列经缺失、插入或替换所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述圣路易斯脑炎病毒特异性引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:6-7所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:6-7所示的核苷酸序列经缺失、插入或替换所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第二类第一Y引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列经缺失、插入或替换所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第二类第二Y引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列经缺失、插入或替换所得具有相同功能的核苷酸序列；