[发明专利]一种间充质干细胞外泌体的制备方法和应用

权利要求书

1.一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1:用完全培养基分别接种三批间充质干细胞培养液进行细胞融合，分别记为第一批、第二批和第三批；

在第一批间充质干细胞培养液中加入含有药物溶液的基础培养基进行饥饿培养，离心，收集第一上清液；

S2：在第二批间充质干细胞培养液中加入所述第一上清液进行饥饿培养，离心，收集第二上清液；

S3：在第三批间充质干细胞培养液中加入所述第二上清液进行饥饿培养，离心，收集上清液得到所述间充质干细胞外泌体；

所述药物溶液的溶质为3,3’-二吲哚甲烷。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述药物溶液的溶剂为二甲基亚砜；

所述药物溶液的溶质在所述基础培养基中的浓度为(40～60)μM。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一批间充质干细胞培养液中的细胞密度为(5～6)×10⁴个细胞/mL，所述第二批间充质干细胞培养液中的细胞密度为(4～5)×10⁴个细胞/mL，所述第三批间充质干细胞培养液中的细胞密度为(3～4)×10⁴个细胞/mL。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二批间充质干细胞培养液与所述第一上清液的体积比为1：(1～1.5)，所述第三批间充质干细胞培养液与所述第二上清液的体积比为1：(0.5～1)。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述完全培养基为含有10％FBS的DMEM/F12；

所述基础培养基为无酚红的1640培养基或无酚红的MEMα培养基。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述细胞融合度为85％-95％。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，细胞融合之后，每一次进行饥饿培养之前，还进行：

用氯化钠注射液清洗间充质干细胞培养液。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述饥饿培养的时间为24h，所述离心的离心力为800g-1000g，所述离心的时间为10-15min。

9.一种间充质干细胞外泌体，其特征在于，由权利要求1～8任意一项所述的制备方法制备得到。

10.3,3’-二吲哚甲烷在制备间充质干细胞外泌体中的应用。