[发明专利]一种间充质干细胞外泌体的制备方法和应用

说明书

本申请属于干细胞培养技术领域。本申请提供了一种间充质干细胞外泌体提取液的制备方法和应用。本申请的制备方法先将间充质干细胞在完全培养基中培养，再在含有药物的基础培养基进行饥饿培养，能够得到大量的、纯度高的间充质干细胞外泌体，本申请制备得到的间充质干细胞外泌体提取液不仅具有优异的细胞增殖效果，还具有一定的抗炎和清除皮脂堆积的作用。实验结果显示，本申请制备得到的间充质干细胞外泌体能调控炎症反应，保护受损组织，降低炎症毒性伤害并提升组织耐受性，具有明显的面部痤疮治愈作用，不会造成皮肤损伤和过敏反应。

技术领域

本申请属于干细胞培养技术领域，尤其涉及一种间充质干细胞外泌体的制备方法和应用。

背景技术

痤疮也称为青春痘，是面部痤疮是一种常见的皮肤病，一般多见于青少年。面部痤疮有很多种类型，以面部粉刺、丘疹、脓疱、结节等多形性皮损为主。严重的还会化脓，因此面部痤疮需要及时进行治疗。现有的祛痘类药物的主要成分均为化学物质，易对人体皮肤造成损伤。

脐带间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是一种多功能干细胞，在培养过程中可分泌多种外泌体(exosome，exo)，外泌体是一种微小的膜性囊泡结构，可将信息传递至损伤细胞或组织从而参与组织再生。在脐带来源脐带间充质外泌体(MSC-EXO)的研究报道中，MSC-EXO不仅具有强大的组织修复和免疫调节作用，还拥有更显著的安全性。还有研究证明，脐带MSC-EXO可以促进细胞增殖和保护细胞免受过氧化氢诱导的凋亡。

由于脐带间充质干细胞具备方便获得、增殖能力强和免疫原性低的优势，已被广泛用于再生医学及各种疾病的治疗研究。而脐带间充质干细胞外泌体能够促进皮肤成纤维细胞增殖，加速创面愈合及血管生成特性，现已越来越多用于医学美容。

但是，目前脐带间充质干细胞的提取方法很难获取大量、纯度较高的脐带间充质干细胞外泌体，无法满足其在治疗面部痤疮类皮肤疾病的治疗作用。

发明内容

有鉴于此，本申请提供了一种间充质干细胞外泌体的制备方法和应用，能够得到大量的、纯度高的间充质干细胞外泌体。

本申请的具体技术方案如下：

本申请第一方面提供一种间充质干细胞外泌体的制备方法，包括如下步骤：

S1:用完全培养基分别接种三批间充质干细胞培养液进行细胞融合，分别记为第一批、第二批和第三批；

在第一批间充质干细胞培养液中加入含有药物溶液的基础培养基进行饥饿培养，离心，收集第一上清液；

S2：在第二批间充质干细胞培养液中加入所述第一上清液进行饥饿培养，离心，收集第二上清液；

S3：在第三批间充质干细胞培养液中加入所述第二上清液进行饥饿培养，离心，收集上清液得到所述间充质干细胞外泌体；

所述药物溶液的溶质为3,3’-二吲哚甲烷。

优选的，所述药物溶液的溶剂为二甲基亚砜；

所述药物溶液的溶质在所述基础培养基中的浓度为(40～60)μM。

优选的，所述第一批间充质干细胞培养液中的细胞密度为(5～6)×10⁴个细胞/mL，所述第二批间充质干细胞培养液中的细胞密度为(4～5)×10⁴个细胞/mL，所述第三批间充质干细胞培养液中的细胞密度为(3～4)×10⁴个细胞/mL。

优选的，所述第二批间充质干细胞培养液与所述第一上清液的体积比为1：(1～1.5)，所述第三批间充质干细胞培养液与所述第二上清液的体积比为1：(0.5～1)。

优选的，所述完全培养基为含有10％FBS的DMEM/F12；