[发明专利]一株表达猪瘟病毒NS3蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及抗体与试剂盒

权利要求书

1.一株表达猪瘟病毒NS3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系CSFV-NS3H，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2020227，其特征在于，由如下方法制得：

S1、重组猪瘟病毒NS3抗原的制备：将猪瘟病毒NS3蛋白与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂充分混合10～20min，制得重组NS3抗原；

S2、用步骤S1制得的重组NS3抗原免疫小鼠，并进行细胞融合，得融合细胞；

S3、筛选步骤S2所得融合细胞中可以分泌猪瘟病毒NS3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，标记为CSFV-NS3H，即得。

2.如权利要求1所述的杂交瘤细胞系CSFV-NS3H，其特征在于，步骤S1所述猪瘟病毒NS3蛋白的加入量为初次免疫为100μg/只，二次和三次免疫为50μg/只，弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂按体积比1～3：5～8加入。

3.如权利要求1所述的杂交瘤细胞系CSFV-NS3H，其特征在于，步骤S2所述用重组NS3抗原免疫小鼠的具体操作过程为：取步骤S1所得重组抗原与等体积的弗氏完全佐剂混匀后，腹腔注射BALB/c小鼠；一免后14和28天，取等量的重组抗原及弗氏完全佐剂混合，多点皮下注射相同小鼠进行二次和三次免疫，每次免疫后7天尾静采血，采用ELISA方法检测免疫应答水平；三免后14天，于小鼠尾静脉取血，以重组抗原包被，ELISA检测血清效价，取效价大于5×10⁶的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合；用含15％胎牛血清的DMEM/F-12培养基筛选融合细胞，即可。

4.如权利要求1所述杂交瘤细胞系CSFV-NS3H，其特征在于，步骤S3所述筛选融合细胞的具体操作为：间接ELISA法筛选细胞培养上清，选择效价较高的阳性克隆杂交瘤细胞进行亚克隆化，并用有限稀释法连续克隆化3-5次，直至细胞阳性率达100％，筛选到10～15株能获得稳定分泌抗猪瘟病毒NS3蛋白单克隆抗体的细胞株，将筛选到的细胞表达的抗体分别跟猪瘟标准强毒石门株及多株野毒株和猪瘟兔弱毒疫苗株反应，得到仅能与猪瘟标准强毒石门株及野毒株结合，但与猪瘟兔化弱毒疫苗株不发生反应的细胞株，标记为CSFV-NS3H。

5.一种猪瘟病毒NS3蛋白的NS3H单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述CSFV-NS3H杂交瘤细胞株表达；所述CSFV-NS3H杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C2020227。

6.如权利要求5所述的猪瘟病毒NS3蛋白的NS3H单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为IgM的亚型，轻链为λ链。

7.一种猪瘟病毒间接免疫荧光检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求5或6所述的猪瘟病毒NS3蛋白NS3H的单克隆抗体。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包含纤维蛋白原，质量分数为0.88％的氯化钠溶液。

9.利用权利要求1所述杂交瘤细胞系CSFV-NS3H表达单克隆抗体的方法，包括如下步骤：无血清培养CSFV-NS3H杂交瘤细胞，收集上清，采用自切割自聚集功能的融合标签纯化单克隆抗体，以SDS-PAGE测定单克隆抗体纯度，即得；

所述CSFV-NS3H杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C2020227。

10.如权利要求9所述表达单克隆抗体的方法，其特征在于，所述无血清培养采用HL-1TM完全无血清培养基培养细胞。