[发明专利]一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法

权利要求书

1.一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，其特征在于，所述方法利用密螺旋体属TP0136蛋白异质性建立。

2.根据权利要求1所述的一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，其特征在于，具体步骤为：

取待分型密螺旋体属菌株，培养，分离螺旋体；

取所述分离螺旋体扩增其TP0136 DNA序列，测序；

（3）将所述测序结果与密螺旋体属分型的序列进行比对，即成；

所述密螺旋体属分型的序列为SEQ ID NO.1-10任一所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，其特征在于，所述的密螺旋体属包括9株梅毒苍白密螺旋体、3株不引起人类性病的雅司苍白密螺旋体、1株未分类的类人猿密螺旋体、1株地方密螺旋体和广东省内23株梅毒苍白密螺旋体临床分离株。

4.根据权利要求2所述的一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，其特征在于，步骤（1）中所述的密螺旋体属菌株培养中所用到的1 X细胞裂解缓冲液中包含10 mM Tris，0.1 M EDTA，0.5％SDS；2X细胞裂解缓冲液中包含20mM Tris-HCl, 0.2MEDTA, 1% SDS。

5.根据权利要求2所述的一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，其特征在于，步骤（2）中所述扩增时所用到的引物对序列如SEQ ID NO:11和12所示或SEQ ID NO:13和14所示的核苷酸序列。

6.根据权利要求2所述的一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，其特征在于，步骤（2）中所述扩增的反应体系为：每50μL PCR扩增反应试剂含5μL 待检测DNA样本、200μM dNTPs、5μL 10 ×Go Taq PCR缓冲液、1.5 mM MgCl₂、0.6μM TP0136引物、0.5 U热启动Taq PCR聚合酶。

7.根据权利要求2所述的一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，其特征在于，步骤（2）中所述扩增的条件为：95℃变性10 min；95℃1 min、60℃2 min、72℃1 min，共45个循环；最后72℃延伸10 min。

8.根据权利要求2所述的一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，其特征在于，步骤（2）中所述测序采用双向DNA测序法。