[发明专利]一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法

说明书

本发明公开了一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，涉及一种对密螺旋体进行分型方法，所述方法利用密螺旋体属TP0136蛋白异质性建立。本发明方法通过检测密螺旋体属TP0136蛋白异质性，用于区分密螺旋体的种类，弥补了密螺旋体属鉴别诊断检测方法的空白；具有检测结果灵敏度和特异性高的特点，易于推广。

技术领域

本发明涉及一种对密螺旋体的分型方法，具体涉及一种利用TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法。

背景技术

密螺旋体属包括雅司苍白密螺旋体、未分类的类人猿密螺旋体、地方密螺旋体和梅毒苍白密螺旋体等。雅司苍白密螺旋体作为雅司病的病原体，通过接触传播，可在儿童和青年中引起持续性感染，以溃疡、结节为皮损特征，继而累及骨骼、软组织。未分类的类人猿密螺旋体与雅司苍白密螺旋体的镜下形态、遗传特征极为相似，可感染人类造成视网膜色素沉着、视神经盘萎缩等视神经损害。地方密螺旋体通过直接或间接接触传播引起地方性梅毒（非性病性梅毒），临床症状与血清学检测难以和梅毒进行区分，且其基因组与雅司苍白密螺旋体非常相似。梅毒苍白密螺旋体导致的系统性性传播疾病——梅毒，由于传播广、危害大，越来越引起全球的关注。密螺旋体属抗原谱研究显示，梅毒苍白密螺旋体、雅司苍白密螺旋体、未分类的类人猿密螺旋体和地方密螺旋体之间抗原性差异极小，比较基因组学研究证实这些密螺旋体属菌株间具有高度亲缘性。此外，临床常用的梅毒苍白密螺旋体血液学检查方法（如TPPA、TPHA、Tp-Ab等）和流行病学研究采用的分子分型方法无法对四者进行有效区分。因此寻找一种适合的密螺旋体属分型方法，对密螺旋体的分子流行病学研究和临床防治十分关键。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种快速、准确、简便、适于区分密螺旋体属的分子分型方法，以便于密螺旋体感染的鉴别诊断。我们前期研究发现，在密螺旋体属不同菌种中TP0136存在蛋白异质性。利用这一特点，本发明通过研究TP0136蛋白在梅毒苍白密螺旋体、雅司苍白密螺旋体、未分类的类人猿密螺旋体和地方密螺旋体各亚种之间的异质性，建立一种新的密螺旋体属分子分型方法。本发明利用密螺旋体属TP0136存在的蛋白异质性，基于分子生物学技术，建立新的TP0136密螺旋体属分子分型方法，不仅可用于密螺旋体属亚种的区分，还有助于密螺旋体感染的鉴别诊断。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种基于TP0136蛋白异质性建立的密螺旋体属分子分型方法，所述方法利用密螺旋体属TP0136蛋白异质性建立；

具体步骤为：取待分型密螺旋体属菌株，培养，分离螺旋体；取所述分离螺旋体扩增其TP0136 DNA序列，测序；将所述测序结果与密螺旋体属分型的序列进行比对，即成。所述密螺旋体属分型的序列为SEQ ID NO.1-10任一所示的氨基酸序列。

进一步的，所述的密螺旋体属包括9株梅毒苍白密螺旋体、3株不引起人类性病的雅司苍白密螺旋体、1株未分类的类人猿密螺旋体、1株地方密螺旋体和广东省内23株梅毒苍白密螺旋体临床分离株。

进一步的，步骤（1）中所述的密螺旋体属菌株培养中所用到的1 X细胞裂解缓冲液中包含10 mM Tris，0.1 M EDTA，0.5％SDS；2X细胞裂解缓冲液中包含20mM Tris-HCl,0.2M EDTA, 1% SDS。

进一步的，步骤（3）中所述扩增时所用到的引物对序列如SEQ ID NO:11和12所示或SEQ ID NO:13和14所示的核苷酸序列。

进一步的，步骤（3）中所述扩增的反应体系为：每50μL PCR扩增反应试剂含5μL 待检测DNA样本、200μM dNTPs、5μL 10 ×Go Taq PCR缓冲液、1.5 mM MgCl₂、0.6μM TP0136引物、0.5 U热启动Taq PCR聚合酶。