[发明专利]一种来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法及应用

权利要求书

1.一种来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1，人底蜕膜间充质干细胞的制备；

步骤2，外泌体的制备。

2.如权利要求1所述的来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，步骤1中所述人底蜕膜间充质干细胞的制备的具体步骤为：

(1)取胎盘，用PBS冲洗胎盘表面血水，剥离出底蜕膜组织，去除多余杂质，将底蜕膜剪成1-4mm²，加入Ⅱ型胶原酶和Ⅳ型胶原酶，放入恒温摇床，37℃，180r/min，消化60min；

(2)消化结束后，用100μm细胞筛网过滤消化后的混合液，离心，弃上清，收集离心获得的细胞；

(3)将细胞接种于T175培养瓶内，置于37℃，0.5％CO₂培养箱内培养培养48h；

(4)48h后换液，去除未贴壁的细胞，每隔3天进行换液，待细胞融合率达到80％～90％时，进行细胞传代，将细胞从P0代传至P1代，得人底蜕膜间充质干细胞。

3.如权利要求1所述的来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，步骤2中所述外泌体的制备的具体步骤为：

1)将底蜕膜间充质干细胞传至P3代，并收集P1-P3代细胞培养上清；

2)将细胞上清依次用40μm细胞筛、、0.45μm滤膜、0.22μm滤膜过滤，收集过滤后的细胞上清，100000×g，在4℃下，离心90分钟，弃上清，用注射用水重悬沉淀，得到外泌体悬液，4℃保存备用。

4.一种来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体在化妆品领域的应用，其特征在于，所述来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体用于制备化妆品原料。

5.一种如权利要求4所述的来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体在化妆品领域的应用，化妆品产品的各组分及其百分含量如下：

底蜕膜间充质干细胞外泌体 0.1％-1％，

透明质酸钠 0.1％-1％，

丁二醇 1％-10％，

余量为注射用水。

6.一种如权利要求5所述的来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体在化妆品领域的应用，所述化妆品的制备方法具体为：

将各组分充分溶解后室温搅拌30min，得到人底蜕膜间充质干细胞外泌体；

各组分及其百分含量如下：

底蜕膜间充质干细胞外泌体 0.1％-1％，

透明质酸钠 0.1％-1％，

丁二醇 1％-10％，

余量为注射用水。