[发明专利]一种来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法及应用；所述方法包括如下步骤：人底蜕膜间充质干细胞的制备；外泌体的制备。本发明还涉及前述的来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体在化妆品领域的应用。本发明方法制备得到的来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体，可用于划化妆品的原料；本发明可作为妊娠纹产品的原料之一，效果非常显著。本发明所涉及的原料人底蜕膜间充质干细胞，是采用胎盘制备的，实现了转废为宝。

技术领域

本发明属于生物技术领域；尤其涉及一种来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法及应用。

背景技术

底蜕膜间充质干细胞是来源于胎盘母体面底蜕膜的干细胞，与胎儿母亲的基因型一致，因此对于母亲本身而言，在疾病治疗、产后修复等方面，胎盘底蜕膜间充质干细胞的生物利用率高。

妊娠纹的形成主要是由于妊娠期荷尔蒙的影响，加之腹部膨隆使皮肤的弹力纤维与胶原纤维损伤或断裂，腹部皮肤变薄变细，出现一些宽窄不同、长短不一的粉红色或紫红色的波浪状花纹。分娩后，这些花纹会逐渐消失，留下白色或银白色的有光泽的瘢痕线纹，即妊娠纹。妊娠纹主要出现在腹壁上，也可能出现在大腿内外侧、臀部、胸部、后腰部及手臂等处。

发明内容

本发明的目的是提供了一种来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法及应用。

第一方面，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体的制备方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1，人底蜕膜间充质干细胞的制备；

步骤2，外泌体的制备。

优选地，步骤1中所述人底蜕膜间充质干细胞的制备的具体步骤为：

(1)取胎盘，用PBS冲洗胎盘表面血水，剥离出底蜕膜组织，去除多余杂质，将底蜕膜剪成1-4mm²，加入Ⅱ型胶原酶和Ⅳ型胶原酶，放入恒温摇床，37℃，180r/min，消化60min；

(2)消化结束后，用100μm细胞筛网过滤消化后的混合液，离心，弃上清，收集离心获得的细胞；

(3)将细胞接种于T175培养瓶内，置于37℃，0.5％CO₂培养箱内培养48h；

(4)48h后换液，去除未贴壁的细胞，每隔3天进行换液，待细胞融合率达到80％～90％时，进行细胞传代，将细胞从P0代传至P1代，得人底蜕膜间充质干细胞。

优选地，步骤2中所述外泌体的制备的具体步骤为：

1)将底蜕膜间充质干细胞传至P3代，并收集P1-P3代细胞培养上清；

2)将细胞上清依次用40μm细胞筛、、0.45μm滤膜、0.22μm滤膜过滤，收集过滤后的细胞上清，100000×g(×g为相对离心力RCF的单位)，在4℃下，离心90分钟，弃上清，用注射用水重悬沉淀，得到外泌体悬液，4℃保存备用。

第二方面，本发明还涉及前述的来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体在化妆品领域的应用，所述来源于人底蜕膜间充质干细胞外泌体用于制备化妆品原料。

优选地，化妆品产品的各组分及其百分含量如下：

底蜕膜间充质干细胞外泌体 0.1％-1％，

透明质酸钠 0.1％-1％，

丁二醇 1％-10％，

余量为注射用水。

优选地，所述化妆品的制备方法具体为：