[发明专利]一种高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法

权利要求书

1.一种高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤1：将芸豆放入浸泡清洗设备中，在浸泡清洗设备中注入温度为15-35℃的纯化水，使纯化水淹没芸豆，处理30-45min；清洗过程中，进水口匀速进水，出水口匀速出水，进水流量为每小时100-200倍芸豆质量；同时，清洗过程中每间隔5-7min，启动超声波处理一次；

步骤2：将步骤1得到的芸豆沥去表面水分，采用真空表压-0.09~-0.10 Mpa、温度35-40℃进行干燥处理30-60min；然后将干燥后的芸豆放入球磨机中，在氮气保护下研磨至物料细度低于60目，得到芸豆粉；

步骤3：将芸豆粉放入二氧化碳超临界萃取设备的萃取釜中，进行萃提除杂处理，收集萃提后留下的物质；

步骤4：将步骤3得到的萃提后留下的物质与中性pH缓冲溶液按质量比1:8-12混合；然后以60-120r/min对混合物料进行搅拌4-6h，接着对混合物料采用转速3000-4000 r/min离心处理5-10min，收集上清液，即为芸豆蛋白粗提液；

步骤5：向所述芸豆蛋白粗提液中加入酸液并不断搅拌，调节芸豆蛋白粗提液的pH值为3.4-3.8，然后静置沉淀30-45min；将静置后的溶液采用转速1000-2000 r/min离心处理5-10min，收集上清液；

步骤6：向步骤5得到的上清液中加入其质量0.75-1.5%的活性炭，搅拌90-180s后静置30-45min；将静置后的物料采用转速1000-2000 r/min离心处理5-10min，收集上清液；

步骤7：对步骤6得到的上清液采用sephacryls-200分子筛凝胶过滤柱层析处理，收集层析纯化后的物料，即为芸豆凝集素。

2.根据权利要求1所述的高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：步骤1中，超声波频率为25-35 KHz、功率密度为0.25-0.50W/cm²，每次处理时间为1.0-1.5min。

3.根据权利要求1所述的高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：所述萃提除杂处理包括采用2次连续的超临界萃取操作，第一次萃取的工艺参数为：萃取压力25-30Mpa、萃取温度37.0±0.3℃、萃取时间15-30min；第二次萃取的工艺参数为：萃取压力28-33Mpa、萃取温度45.0±0.3℃、萃取时间15-30min。

4.根据权利要求1所述的高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：所述中性pH缓冲溶液为pH 7.2 PBS缓冲溶液或者Tris-Hcl缓冲溶液。

5.根据权利要求4所述的高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：所述中性pH缓冲溶液的离子强度为10-20 mM。

6.根据权利要求1所述的高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：所述酸液为柠檬酸、醋酸、磷酸中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：所述活性炭为干燥的食品用活性炭，比表面积10-20m²/g。

8.根据权利要求1所述的高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：采用sephacryls-200分子筛凝胶过滤柱层析处理的操作为：pH 7.2 PBS缓冲溶液体系平衡凝胶色谱柱，不超过15%柱体积样品上样，继续采用pH 7.2 PBS缓冲溶液洗脱，流速0.8 ml/min，收集第一个峰区域样品，冷冻干燥后即为高纯度芸豆凝集素。