[发明专利]一种高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法

说明书

本发明提供了一种高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，以芸豆为原料，经过超声波辅助流水清洗、充氮气球磨、超临界萃提除杂、常温浸提、酸沉淀、活性炭吸附、分子筛层析等处理，提取与精制得到了高纯度芸豆凝集素。本发明制得的芸豆凝集素，纯度高，可作为食品、药品的原料，市场前景良好。

技术领域

本发明属于农产品精深加工技术领域，涉及一种高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法。

背景技术

芸豆，学名菜豆，俗称二季豆或四季豆，属于蔷薇目豆科菜豆属的植物，一年生、缠绕或近直立草本植物。芸豆喜温暖，不耐霜冻，原产于美洲，现已在我国广泛栽培。芸豆是一种可以食用的豆科植物，嫩荚或种子可作鲜菜，也可加工制作罐头、腌渍、冷冻、干制等。芸豆的药用价值也很高，我国古代医籍记载，芸豆味甘平，具有温中下气、利肠胃、止呃逆、益肾补元等功用，是一种滋补食疗佳品；现代医学分析，芸豆含有凝集素等多种球蛋白，对多种病症具有一定疗效。

凝集素（Lectin）是指一种从各种植物、无脊椎动物或高等动物中提纯的一类能凝集细胞和沉淀单糖或多糖复合物的非免疫来源的非酶蛋白质。植物凝集素是凝集素的一类，由于其对于单糖或糖复合物特异性结合的能力，使得其在如信号转导、免疫反应、植物防御等诸多信号过程中均具有重要作用；同时植物凝集素具有细胞凝集、抗病毒、抗真菌及诱导细胞凋亡或自噬等多种能力；因此，植物凝集素在生命科学、医学及农业方面均有较好的研究价值和应用前景。

芸豆凝集素（Phytohemagglutinin PHA）是一类从芸豆中提取的四聚体糖蛋白，具有糖结合专一性、α-葡萄糖苷酶抑制活性、诱发人外周血淋巴细胞产生抗癌淋巴因子以及抗HIV病毒等有益的生物学活性，在医药学领域有广泛的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种高纯度芸豆凝集素的提取与精制方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤1：将芸豆放入浸泡清洗设备中，在浸泡清洗设备中注入温度为15-35℃的纯化水，使纯化水淹没芸豆，处理30-45min；清洗过程中，进水口匀速进水，出水口匀速出水，进水流量为每小时100-200倍芸豆质量；同时，清洗过程中每间隔5-7min，启动超声波处理一次；

步骤2：将步骤1得到的芸豆沥去表面水分，采用真空表压-0.09~-0.10 Mpa、温度35-40℃进行干燥处理30-60min；然后将干燥后的芸豆放入球磨机中，在氮气保护下研磨至物料细度低于60目，得到芸豆粉；

步骤3：将芸豆粉放入二氧化碳超临界萃取设备的萃取釜中，进行萃提除杂处理，收集萃提后留下的物质；

步骤4：将步骤3得到的萃提后留下的物质与中性pH缓冲溶液按质量比1:8-12混合；然后以60-120r/min对混合物料进行搅拌4-6h，接着对混合物料采用转速3000-4000 r/min离心处理5-10min，收集上清液，即为芸豆蛋白粗提液；

步骤5：向所述芸豆蛋白粗提液中加入酸液并不断搅拌，调节芸豆蛋白粗提液的pH值为3.4-3.8，然后静置沉淀30-45min；将静置后的溶液采用转速1000-2000 r/min离心处理5-10min，收集上清液；

步骤6：向步骤5得到的上清液中加入其质量0.75-1.5%的活性炭，搅拌90-180s后静置30-45min；将静置后的物料采用转速1000-2000 r/min离心处理5-10min，收集上清液；

步骤7：对步骤6得到的上清液采用sephacryls-200分子筛凝胶过滤柱层析处理，收集层析纯化后的物料，即为芸豆凝集素。