[发明专利]BRAFV600E

权利要求书

1.一种BRAF^V600E突变比例检测试剂盒，其特征在于，包括：

引物一，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

引物二，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

探针一，包括如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列一和分别连接所述核苷酸序列一5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团；以及

探针二，包括如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列二和分别连接所述核苷酸序列二5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团。

2.如权利要求1所述的BRAF^V600E突变比例检测试剂盒，其特征在于，所述核苷酸序列一的5’端连接FAM荧光基团，所述核苷酸序列一的3’端连接MGB淬灭基团；所述核苷酸序列二的5’端连接HEX荧光基团，所述核苷酸序列二的3’端连接MGB淬灭基团。

3.一种BRAF^V600E突变比例检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获得待测样品，并提取待测样品的ctDNA；

(2)利用引物一、引物二、探针一和探针二，以步骤(1)中获取的所述ctDNA为模板，进行数字PCR扩增，并扫描FAM与HEX通道荧光信号；

(3)利用步骤(2)中FAM与HEX通道的荧光信号，计算不同通道的核酸拷贝数，获得基因位点的突变比例；

其中，所述引物一的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述引物二的核苷酸序列如SEQID No.2所示；所述探针一包括如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列一和分别连接所述核苷酸序列一5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团；所述探针二包括如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列二和分别连接所述核苷酸序列二5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团。

4.如权利要求3所述的BRAF^V600E突变比例检测方法，其特征在于，所述核苷酸序列一的5’端连接FAM荧光基团，所述核苷酸序列一的3’端连接MGB淬灭基团；所述核苷酸序列二的5’端连接HEX荧光基团，所述核苷酸序列二的3’端连接MGB淬灭基团。