[发明专利]一种农杆菌介导的毛华菊遗传转化方法

权利要求书

1.农杆菌介导的毛华菊遗传转化方法，包括：

1）以毛华菊叶片为外植体，采用含有重组农杆菌的侵染液侵染所述毛华菊叶片，将侵染后的毛华菊叶片于共培养培养基上共培养，得到共培养后的外植体；所述重组农杆菌含有载有目的DNA的重组表达载体；所述共培养培养基由溶剂和溶质组成，所述溶剂为MS培养基，所述溶质及其在所述共培养培养基中的浓度分别为萘乙酸1 mg/L、6-苄氨基腺嘌呤2mg/L，pH值为6；

所述毛华菊为毛华菊CVW或毛华菊CVZ，所述毛华菊CVW在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）的保藏编号为CGMCC No.20705，所述毛华菊CVZ在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）的保藏编号为CGMCC No.20706；

2）将所述共培养后的外植体于分化筛选培养基上培养，得到毛华菊抗性芽；所述分化筛选培养基由溶剂和溶质组成，所述溶剂为MS培养基，所述溶质及其在所述分化筛选培养基中的浓度分别为萘乙酸1 mg/L、6-苄氨基腺嘌呤2 mg/L以及相应浓度的抗生素，pH值为6；

3）将所述毛华菊抗性芽于生根筛选培养基上培养，得到毛华菊抗性植株；所述生根筛选培养基由溶剂和溶质组成，所述溶剂为1/2 MS培养基，所述溶质及其在所述生根筛选培养基中的浓度分别为萘乙酸0.2 mg/L以及相应浓度的抗生素，pH值为6；

4）从所述毛华菊抗性植株中筛选含有所述目的DNA的阳性植株，得到完成遗传转化的毛华菊阳性植株；

步骤1）中，所述侵染液的浓度满足OD600值为0.6；所述侵染的时间为10分钟；所述共培养的时间为3天；所述共培养的条件为：黑暗，培养温度（21 ± 1）℃；

步骤2）中所述培养的条件为：光照强度为3000 lx，光照周期为14-16小时光照/8-10小时黑暗，温度（21 ± 1）℃；

步骤3）中所述培养的条件为：光照强度为3000 lx，光照周期为14-16小时光照/8-10小时黑暗，培养温度为（21 ± 1）℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法还包括利用所得完成遗传转化的毛华菊植株获得再生植株。

3.权利要求1或2所述方法在培育毛华菊品种/品系中的应用。