[发明专利]猪伪狂犬病毒gBgD抗体检测试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒gBgD抗体检测试剂盒，所述试剂盒能同时检测猪伪狂犬病毒gB抗原抗体和gD抗原抗体，其特征在于，所述的试剂盒中的抗原包被板为同时包被有PRV-gB蛋白和PRV-gD蛋白的酶标板。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗原包被板上PRV-gB蛋白和PRV-gD蛋白的包被浓度均为100ng/孔/100μL。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括：样品稀释液、浓缩洗涤液、酶标抗体、显色液、终止液、阳性对照、阴性对照、质控品1、质控品2和质控品3；其中，

所述的样品稀释液为含有2％BSA的1×PBST溶液；

所述的浓缩洗涤液为25×PBST溶液，在使用前稀释到1×PBST溶液；

所述的酶标抗体为羊抗猪IgG酶标抗体；

所述的显色液为TMB单组分溶液；

所述的终止液为2M的H₂SO₄溶液；

所述的阳性对照为PRV抗体OD450nm值在0.9～1.5之间的阳性血清；

所述的阴性对照为PRV抗体OD450nm值小于0.2的阴性血清；

所述的质控品1为S/P值在1.5～2.0之间的强阳性血清；

所述的质控品2为S/P值在0.5～1.0之间的弱阳性血清；

所述的质控品3为S/P值小于0.35的阴性血清。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照为PRV抗体OD450nm值在1.0～1.2之间的阳性血清。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的阴性对照为PRV抗体OD450nm小于0.1的阴性血清。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照孔每孔OD450nm读数大于0.5且各孔间最大差值应0.3，阴性对照孔每孔OD450nm读数0.3，空白对照OD450nm读数＜0.1，质控品1的S/P值在1.5～2.0之间，质控品2的S/P值在0.5～1.0之间，质控品3的S/P值＜0.35时，试验成立，结果有效。

7.一种使用权利要求1至6任一权利要求所述的试剂盒对待检样品进行检测的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)样本稀释：用样品稀释液将待检样本进行1:100倍稀释；

2)加样本：根据待检样品数量，取可拆卸包被板，平放桌面，加入稀释好的待检血清100μL/孔，同时设阳性对照、阴性对照各2孔，质控品1、质控品2、质控品3、空白对照各1孔；

3)孵育：置37℃温箱孵育30分钟；

4)洗涤：甩去孔内液体，加入洗涤液，300μL/孔，洗涤3～5次，每次静置30秒，甩去孔内液体，拍干；

5)二抗孵育：对应孔中加入羊抗猪IgG酶标抗体，100μL/孔，置37℃温箱孵育30分钟；

6)洗涤：甩去孔内液体，加入洗涤液，300μL/孔，洗涤3～5次，每次静置30秒，甩去孔内液体，拍干；

7)显色：加入显色液，100μL/孔，置37℃温箱避光孵育10分钟；

8)终止：加入终止液，50μL/孔，轻微震荡混合均匀；

9)读数：加入终止液后，立即将包被板置于酶标仪中，在波长为450nm下读取OD450nm值；

10)S/P值计算：按照以下计算公式，计算S/P值：

11)试验有效性断判：阳性对照孔每孔OD450nm读数应大于0.5且各孔间最大差值应0.3，阴性对照孔每孔OD450nm读数应0.3，空白对照OD450nm读数＜0.1，质控品1的S/P值在1.5～2.0之间，质控品2的S/P值在0.5～1.0之间，质控品3的S/P值＜0.35；

12)结果判定：当S/P值大于0.399时判为阳性；当S/P值小于等于0.399时判为阴性。