[发明专利]猪伪狂犬病毒gBgD抗体检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明一方面公开了一种猪伪狂犬病毒gBgD抗体检测试剂盒，所述试剂盒能同时检测猪伪狂犬病毒gB抗原抗体和gD抗原抗体，所述的试剂盒中的抗原包被板为同时包被有PRV‑gB蛋白和PRV‑gD蛋白的酶标板。另一方，本发明还提供了一种制备所述试剂盒的方法，所述方法包括抗原包被板的制备、样品稀释液的配制与分装、浓缩洗涤液的配制与分装、酶标抗体的配制与分装、阳性对照的制备、阴性对照的制备、质控品1的制备、质控品2的制备、质控品3的制备、显色液的分装、终止液的配制与分装。本发明的试剂盒能够实现同时检测PRV‑gB蛋白抗体和PRV‑gD蛋白抗体，利于对整体PRV抗体效价的评价。另外本发明的试剂盒稳定性好、灵敏度高、特异性强，能够适用于大规模临床检测。

技术领域

本发明属于病毒疫病诊断技术和动物检疫领域，具体涉及一种猪伪狂犬病毒gBgD抗体检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的猪的急性传染病。该病在猪呈暴发性流行。可引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。

伪狂犬病毒属于疱疹病毒科(Herpesviridae)、猪疱疹病毒属，病毒粒子为圆形，直径150～ 180nm，核衣壳直径为105～110nm。病毒粒子的最外层是病毒囊膜，它是由宿主细胞衍生而来的脂质双层结构。囊膜表面有长约8～10nm呈放射状排列的纤突。伪狂犬病毒基因组是线状双链DNA分子，大小约150kb，平均G+C含量高达74％，具有典型的疱疹病毒基因组结构特征，由独特长区段、独特短区段及位于US两侧的末端重复序列(TR)和内部重复序列(IR)组成。目前已发现11种PRV糖蛋白，其中，gB、gC、gD均为刺激机体产生中和抗体的蛋白，所产生的抗体无论是在体内、体外，还是在有无补体存在的情况下都有中和PRV的能力，因此，gB、 gC、gD是研制PRV亚单位疫苗以及评价疫苗免疫效果的首选糖蛋白，其中尤以gB和gD为最好。

但是，目前市面流行的用于评价PRV免疫效果的试剂盒都只能检测gB蛋白产生的抗体，不能评价gD蛋白产生的抗体，因此对PRV疫苗免疫后的实际情况的评价可能存在一定的假阴性的检测。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一是提供一种能同时评价PRV-gB蛋白和 PRV-gD蛋白的抗体的试剂盒，以弥补现有试剂盒技术的不足。本发明的目的之二是提供了一种制备该试剂盒的方法。

因此，本发明一方面提供了一种猪伪狂犬病毒gBgD抗体检测试剂盒，所述试剂盒能同时检测猪伪狂犬病毒gB抗原抗体和gD抗原抗体，其特征在于，所述的试剂盒中的抗原包被板为同时包被有PRV-gB蛋白和PRV-gD蛋白的酶标板。

优选地，本发明所述的抗原包被板上PRV-gB蛋白和PRV-gD蛋白的包被浓度均为100ng/ 孔/100μL。

优选地，本发明所述的试剂盒还包括：样品稀释液、浓缩洗涤液、酶标抗体、显色液、终止液、阳性对照、阴性对照、质控品1、质控品2和质控品3；其中，所述的样品稀释液为含有2％BSA的1×PBST溶液；所述的浓缩洗涤液为25×PBST溶液，在使用前稀释到1×PBST溶液；所述的酶标抗体为羊抗猪IgG酶标抗体；所述的显色液为TMB单组分溶液；所述的终止液为2M的H2SO4溶液；所述的阳性对照为PRV抗体OD450nm值在0.9～1.5之间的阳性血清；所述的阴性对照为PRV抗体OD450nm值小于0.2的阴性血清；所述的质控品1为 S/P值在1.5～2.0之间的强阳性血清；所述的质控品2为S/P值在0.5～1.0之间的弱阳性血清；所述的质控品3为S/P值小于0.35的阴性血清。

优选地，本发明所述的阳性对照为PRV抗体OD450nm值在1.0～1.2之间的阳性血清。

优选地，本发明所述的阴性对照为PRV抗体OD450nm小于0.1的阴性血清。