[发明专利]一种柱状黄杆菌减毒灭活疫苗制备方法

说明书

本发明提供了一种柱状黄杆菌减毒灭活疫苗制备方法，包括灭活步骤：取培养后的菌，在2‑8℃下，浓度为0.5‑1‰的甲醛溶液中灭活36‑108h。由于柱状黄杆菌毒性强，常规柱状黄杆菌灭活疫苗高剂量使用仍具有安全性风险，同时由于柱状黄杆菌生产过程中易凝聚成团，造成疫苗注射时的“堵针”现象，影响正常的使用。本发明相对于现有技术，通过连续药物筛选出柱状黄杆菌减毒株，在低温下进行甲醛灭活，形成有效的柱状黄杆菌减毒疫苗，不仅解决了疫苗高剂量使用安全性问题，同时减少了疫苗使用时存在的“堵针”问题。

技术领域

本发明涉及一种减毒灭活疫苗制备方法，特别是涉及一种柱状黄杆菌减毒灭活疫苗制备方法。

背景技术

草鱼是我国淡水养殖的主要品种，占淡水养殖产量25％以上，2018年我国草鱼的养殖产量约534万吨，每年由病害造成损失近21亿元。柱状黄杆菌属革兰氏阴性菌，感染包括草鱼、清鱼、鲫鱼、鳜鱼、鮰鱼、鲈鱼等海淡水鱼类近20多科。由柱状黄干菌引起草鱼烂鳃病近些年全国范围内均有爆发，是草鱼养殖中最严重的“老三病”之一。随着国家对水产抗生素使用监管趋于严格，具有预防性、安全性特征的水产细菌疫苗近年愈发受到国家和科研单位重视。

由于柱状黄杆菌毒性强，常规柱状黄杆菌灭活疫苗高剂量使用仍具有安全性风险，同时由于柱状黄杆菌生产过程中易凝聚成团，造成疫苗注射时的堵针现象，影响正常的使用。

发明内容

本发明提供了一种柱状黄杆菌减毒灭活疫苗制备方法，以使疫苗具有良好的效果，并减少传统疫苗易堵针的情况。

本发明提供了一种柱状黄杆菌减毒灭活疫苗制备方法，包括灭活步骤：取柱状黄杆菌，通过利福平50-600μg/mL和妥布霉素1-2μg/mL连续筛选10-40代得到减毒株，在2-8℃下，浓度为0.5-1‰的甲醛溶液中灭活36-108h。

进一步地，所述减毒株筛选步骤采用培养基成份如下：无机盐0.5-1g/L、蛋白胨4-5g/L、凝胶粉15-18g/L，所述无机盐由乙酸钠、二水氯化钡、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、二水氯化钙、七水硫酸亚铁、碳酸氢钠中的一种或多种组成。

更进一步地，所述无机盐包括：乙酸钠0.02g/L，二水氯化钡0.01g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，磷酸二氢钾0.05g/L，七水硫酸镁0.6g/L，二水氯化钙0.0067g/L，七水硫酸亚铁0.002g/L，碳酸氢钠0.05g/L。

更进一步地，所述柱状黄杆菌分离培养基还包括酵母提取物0.4-0.5g/L。

更进一步地，所述凝胶粉为琼脂粉。

更进一步地，所述蛋白胨为胰蛋白胨。

进一步地，灭活步骤具体为：取培养后的菌，在4℃下，浓度为1‰的甲醛溶液中灭活48h。

进一步地，灭活步骤具体为：取培养后的菌，在4℃下，浓度为0.5‰的甲醛溶液中灭活108h。

本发明相对于现有技术，通过在低温下进行甲醛灭活减毒，形成有效的减毒疫苗，同时减少疫苗存在堵针的问题。

附图说明

图1为本发明实施例1灭活前柱状黄杆菌菌落形态；

图2为本发明实施例3灭活前减毒10代(F10)菌落形态；

图3为本发明实施例4灭活前减毒40代(F40)菌落形态。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。