[发明专利]一种有机溶剂浸提法提取葡萄籽中单宁的条件优化方法

权利要求书

1.一种有机溶剂浸提法提取葡萄籽中单宁的条件优化方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)研究料液比、乙醇体积分数、提取时间和提取温度对葡萄籽中单宁提取率的影响：

提取剂乙醇的体积分数对单宁提取率的影响：

取21个三角瓶，分为7组，每组3个平行，向其中加入1g预处理后的原料，向每组三角瓶中分别加入30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的乙醇30mL，用保鲜膜封口后放于60℃的恒温水浴锅中浸提3h；取出后用布氏漏斗真空抽滤，将滤液移入离心管中，3000r/min离心30min；从每个样品液中吸取1mL上清液，置于盛有30mL蒸馏水的50mL容量瓶中，加2.5mLF-D试剂，再加5mL饱和碳酸钠溶液，加水稀释至50mL；摇匀使其充分混合，并于30min后在650nm处测其吸光值；

不同料液比对单宁提取率的影响：

取21个三角瓶，分为7组，每组3个平行，向其中加入1g预处理后的原料，向每组三角瓶中加入50％的乙醇20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL，用保鲜膜封口后放于60℃的恒温水浴锅中浸提3h；取出后用布氏漏斗真空抽滤，将滤液移入离心管中，3000r/min离心30min；从每个样品液中吸取2mL上清液，置于盛有30mL蒸馏水的50mL容量瓶中，加2.5mLF-D试剂，再加5mL饱和碳酸钠溶液，加水稀释至50mL；摇匀使其充分混合，并于30min后在650nm处测其吸光值；

不同提取温度对单宁提取率的影响：

取21个三角瓶，分为7组，每组3个平行，向其中加入1g预处理后的原料，向每组三角瓶中分别加入50％的乙醇30mL，用保鲜膜封口后分别放于20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃的恒温水浴锅中浸提3h。取出后用布氏漏斗真空抽滤，将滤液移入离心管中，3000r/min离心30min。从提取温度为60℃的样品液中吸取1mL上清液，其余的每组都吸取2mL上清液，置于盛有30mL蒸馏水的50mL容量瓶中，加2.5mL F-D试剂，再加5mL饱和碳酸钠溶液，加水稀释至50mL；摇匀使其充分混合，并于30min后在650nm处测其吸光值；

不同提取时间对单宁提取率的影响：

取15个三角瓶，分为5组，每组3个平行，向其中加入1g预处理后的原料，向每组三角瓶中分别加入50％的乙醇30mL，用保鲜膜封口后放于60℃的恒温水浴锅中分别浸提1h、2h、3h、4h、5h；取出后用布氏漏斗真空抽滤，将滤液移入离心管中，3000r/min离心30min；从每个样品液中吸取2mL上清液，置于盛有30mL蒸馏水的50mL容量瓶中，加2.5mLF-D试剂，再加5mL饱和碳酸钠溶液，加水稀释至50mL；摇匀使其充分混合，并于30min后在650nm处测其吸光值；

2)通过单因素实验和响应面优化实验的结果分析，得出最佳的葡萄籽中单宁提取条件：

根据Box-Behnken中心组的实验设计原理，综合单因素对单宁提取率影响的实验结果，选取料液比、提取时间和提取温度3个因素的3个较优水平，在单因素试验基础上采用3因素3水平的响应面分析法进行实验设计，得出数学模型，分析各因素之间的相互作用，以及各因素与响应值之间的关系；

3)在单因素实验的基础上，应用Design-Expert.8.05b软件，采用Box-Behnken Design建立数学模型，以选取乙醇体积分数X1、提取时间X2、提取温度X3三个因素为考察对象，以单宁提取率Y的平均值为响应值，采用三因素三水平的响应面进行实验设计；

4)将步骤3)所得实验结果回归拟合后，得到吸光值对乙醇体积分数、提取次数和提取时间的多元二次回归方程：

Y＝6.1+0.27X1+0.17X2+0.32X3-0.083X1X2+0.071X1X3+0.086X2X3-0.83X12-1.05X22-0.91X32；式中：Y-单宁提取率；X1-乙醇体积分数；X2-浸提时间；X3-浸提温度；

5)根据响应面法运算所得的回归方程求解寻求其最大值点：

Y＝6.1+0.27X1+0.17X2+0.32X3-0.083X1X2+0.071X1X3+0.086X2X3-0.83X12-1.05X22-0.91X32；

当X1＝0.185、X2＝0.088、X3＝0.203时Y值最大，即由此得到最佳的工艺条件为：乙醇的体积分数为51.70％，提取时间为3.08h，提取温度为61.87℃，在此条件下，单宁的提取率高达6.36％。