[发明专利]基于HPLC-ICP-MS分析富硒蛋白多糖硒形态的方法有效
| 申请号： | 202011308803.5 | 申请日： | 2020-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN112630316B | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 王凤芹;曹进平;汪以真;路则庆;程远之 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林松海 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 hplc icp ms 分析 蛋白 多糖 形态 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于HPLC-ICP-MS分析富硒蛋白多糖硒形态的方法，其特征是：在待测富硒蛋白多糖Z0206中加入蛋白酶K，以Tris-HCl缓冲液作为媒介进行酶解，酶解时间为18h，应用HPLC-ICP-MS对酶解液中进行定量分析，得到4种硒化合物：亚硒酸钠Na2SeO3、硒代胱氨酸SeCys2、硒甲基硒代半胱氨酸SeMeCys和硒代蛋氨酸SeMet；所述HPLC-ICP-MS使用的是反相色谱和Hypersil GOLD C18色谱柱；所述反相色谱的流动相为20mM磷酸二氢钾+甲醇，95：5；其中磷酸二氢钾pH 3.7，含0.1%七氟丁酸；
所述方法具体步骤如下：
称取15 mg的富硒蛋白多糖于2 mL EP管中，加入5 mg蛋白酶K，再加入1.5 mL的Tris-HCl缓冲液，0.1 mol/L，pH=7.48，37℃下恒温200 rpm振荡18小时，然后将酶解液离心10min，转速为6000 rpm/min，收集上清液，通过HPLC-ICP-MS对所得酶解液中硒化合物进行分离定量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述的HPLC-ICP-MS对酶解液中进行定量分析，通过参照标准曲线得到待测富硒蛋白多糖中硒化合物的含量。
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