[发明专利]一种腐烂病菌毒素化合物、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种腐烂病菌毒素化合物、制备方法及其应用，该化合物可从苹果树腐烂病菌野生型菌株03‑8中制备得到，也可以通过化学合成的手段通过两步反应得到。该化合物可对苹果树和烟草等植物产生显著的致病症状，可用作植物毒素，制备除草剂。

技术领域

本发明属于植物病理学、天然药物合成技术领域，具体涉及一种腐烂病菌毒素化合物、制备方法及其应用。

背景技术

苹果树腐烂病是由死体营养型真菌黑腐皮壳属Valsa mali Mayabe et Yamada引起。据统计，腐烂病在我国所有苹果树的发病率高达52.7％，是我国乃至东亚苹果树最具破坏性的疾病之一，已严重影响了我国苹果产业所产生的经济效益。对于苹果树腐烂病菌致病毒素的研究，除酶、蛋白等初级代谢产物外，已报道的次生代谢产物主要包括异香豆素类、根皮苷降解产物(芳烃类)和有机酸类，但目前关于苹果树腐烂病菌的防治体系尚不完善。发明人在研究苹果树腐烂病菌的致病机理过程中，提取出了一种腐烂病菌毒素，该毒素对烟草等植物产生较为显著的致病症状，在除草剂方面具有较好的应用前景。

发明内容

针对现有技术存在的不足和缺陷，本发明提供了一种腐烂病菌毒素化合物、制备方法及其应用，该化合物为首次从苹果树腐烂病菌野生型菌株03-8中提取，可用于作植物毒素，应用于除草剂领域。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案予以实现：

一种腐烂病菌毒素化合物，该化合物具有如下式(I)所示的化学结构式：

本发明还公开了上述腐烂病菌毒素化合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，将苹果树皮提取物、0.2％酵母粉、0.5％蔗糖混合，调节混合液pH为5.8，121℃灭菌20min，得到苹果树皮培养基；

步骤2，将苹果树腐烂病菌野生型菌株03-8接种至PDA培养基上，25℃培养3d，所得菌饼接种于步骤1制备的苹果树皮培养基中，26℃进行培养，每天摇瓶4次，转速为120rpm，培养14d，发酵产物抽滤，得到发酵液；

步骤3，将发酵液通过吸附树脂进行梯度洗脱，洗脱剂为甲醇和水，甲醇与水的体积比为30～100：70～0；获得目标馏分；

步骤4，采用液相色谱法对目标馏分进行梯度洗脱，得到化合物；

液相色谱条件为：洗脱剂为乙腈和水，其中乙腈的体积分数为10％～90％，水的体积分数为0～90％，总体积分数之和为100％；洗脱剂流速为8～10mL/min；柱温为25～35℃；检测波长为210～254nm。

优选的，所述步骤4的梯度洗脱为三个梯度，洗脱剂依次分别为：第一次洗脱剂中乙腈与水的体积比为10：90，洗脱时间为5～10min；第二次洗脱剂中乙腈与水的体积比为10～100：90～0，洗脱时间为40～50min；第三次洗脱剂中乙腈与水的体积比为100：0，洗脱时间为5～10min。

具体的，所述步骤3中的吸附树脂为D101型大孔吸附树脂、D101B型大孔吸附树脂、XDA-1型大孔吸附树脂、H-30型大孔吸附树脂、H-60型大孔吸附树脂中的任一种。

优选的，所述步骤2中依次用定性滤纸和0.2～0.45μm滤膜抽滤对发酵产物进行抽滤。

本发明还公开了另一种腐烂病菌毒素化合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，将4-乙烯基苯酚、1,3,5-三甲氧基苯和磷酸二苯酯加入二氯乙烷中，90℃～110℃下进行反应20～22h，产物经洗脱纯化后，得到中间体；

所述4-乙烯基苯酚、1,3,5-三甲氧基苯、磷酸二苯酯的摩尔比为20:40:1；