[发明专利]一种流感H3N2的LAMP引物组筛选方法

说明书

一种流感H3N2的LAMP引物组筛选方法，涉及病毒检测技术领域，包括步骤一：用传统PCR检测确定阳性样本，并以此作为LAMP检测方法的对照；步骤二：利用LAMP引物设计软件设计出多组流感H3N2的LAMP引物组；步骤三：样本逆转录，将样本从RNA样本逆转录成cDNA样本；步骤四：用多组流感H3N2的LAMP引物组对样本进行LAMP试验；步骤五：对步骤四中的产物进行电泳检测；步骤六：根据步骤五中的电泳检测实验结果，筛选出有效的LAMP引物组，本发明通过流感病毒H3N2的相关序列获得流感病毒H3N2典型的LAMP扩增电泳条纹图案，为后续的流感病毒H3N2的检测方法选出合适的引物组。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及到一种流感H3N2的LAMP引 物组筛选方法。

背景技术

流感病毒(InfluenzaVirus)是一种可感染人类和动物的单股负链 RNA病毒，根据病毒核蛋白和基质蛋白的抗原性不同，流感病毒共 分4个型，甲、乙、丙、丁型流感病毒。乙、丙和丁型流感病毒的抗 原很稳定，较少发生变异，但甲型流感病毒上的表面抗原血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)很容易变异， 产生许多亚型。目前已知的HA有18种亚型(H1-H18)，NA有11个 亚型(N1-N11)，HA与NA的随意组合可形成多种亚型。由于该病毒 抗原变异性强、传播迅速，多次引起世界大流行，严重危害人类生命 安全。

来自中国疾控中心的检测数据显示，2018年我国整体的流感流行水平明 显高于往年，占门急诊病例总数的6％，患者人数比往年增加了1倍。这次 流感流行主要是甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亚型及乙型流感病毒中的 Victoria和Yamagata系。

本区流感病原监测数据显示：2014-2018年，共釆集流感样病例的样品 5280份，经检测769份为流感病毒阳性，阳性率14.56％，其中流感H3N2 阳性406份，占52.8％，为本区流感的主要病原体。

目前流感病毒的诊断方法主要有病毒分离培养法、血清学检测法以及分 子生物学检测方法等。随着分子生物学的发展，由于其简便、易操作、更精 确、更快速等特点填补了早期的病毒培养以及血清学的空白。目前，基因诊 断技术发展迅速，应用也越来越广泛。

因此，在流感防控工作中，开发更快速、准确、便捷的基因诊断技术以 检测流感病毒H3N2，对预防其大流行，保障人类健康意义重大。

流感的确诊需要依靠PCR的方法检测病毒核酸，但由于基层医院设备及 技术的限制，PCR法操作较为复杂，需要专业PCR仪器，且耗时较长，难 以推广。又由于PCR方法的高敏感性和特异性，在提取、扩增核酸过程中， 核酸产物易污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统，从而造成实验室污 染，出现假阳性结果。

环介导等温基因扩增技术(loop-mediated isothermalamplification，LAMP)，是由Notomi等在2000年发明的基因扩增方法，该法检测耗时短、灵敏度高、 成本低廉，而且在整个反应过程及后续的结果观察中不需要特殊的仪器设备， 适用于基层早期对流感病毒的检测和诊断。是一种简单快速的核酸扩增技术。

MASAKI等利用LAMP技术对H5N1高致病性禽流感病毒实现快速诊断， 其敏感度和检岀率均优于传统RT-PCR检测方法，可知LAMP比PCR更快 速，灵敏，有着更为广泛的发展前景。因此，为快速、灵敏、准确监测流感H3N2病原，提升传染病防控能力，本发明基于H3N2流感病毒HA基因片 段，利用软件设计出LAMP反应的引物组，开发H3N2流感病毒的LAMP 引物组筛选方法。

发明内容

针对现有技术所存在的不足，本发明目的在于提出一种流感H3N2的 LAMP引物组筛选方法，具体方案如下：

一种流感H3N2的LAMP引物组筛选方法，包括如下步骤：