[发明专利]促甲状腺素释放激素的制备方法及应用

权利要求书

1.一种促甲状腺素释放激素的制备方法，其特征在于，所述制备方法依次包括制备Z-pGlu-ONB、制备Z-pGlu-His-OH、制备Z-pGlu-His-Pro-NH₂和氢解Z-pGlu-His-Pro-NH₂，得到所述促甲状腺素释放激素；

其中，制备Z-pGlu-His-Pro-NH₂的步骤包括：

向Z-pGlu-His-OH和Pro-NH的混合溶液中加入活化剂反应后浓缩至干，浓缩产物加乙腈溶解后结晶析出，得到所述Z-pGlu-His-Pro-NH₂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将Pro-NH的DMF溶液加入Z-pGlu-His-OH的DMF溶液中，得到所述Z-pGlu-His-OH和Pro-NH的混合溶液；

优选地，所述活化剂包括HONB和DCCI，优选在所述Z-pGlu-His-OH和Pro-NH的混合溶液中先加入HONB，然后在搅拌下滴加DCCI；

优选地，加入活化剂反应的温度为10～30℃，反应的时间为8～24小时；

优选地，在加入活化剂前还包括冷却的步骤，所述冷却的温度为-2～2℃，优选为0℃；

优选地，在浓缩前还包括过滤的步骤。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩包括减压浓缩，优选压力为-0.09～-0.1MPa；

优选地，加乙腈溶解后置于2～10℃至结晶析出；

优选地，结晶析出后还包括过滤的步骤；

优选地，将分离出的结晶进行干燥处理，得到Z-pGlu-His-Pro-NH₂；

优选地，干燥前还包括将析出的结晶使用乙腈进行清洗的步骤。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备Z-pGlu-ONB的步骤包括：

取Z-pGlu和HONB，加入二氧六环和四氢呋喃，进行活化酯反应，将反应产物以乙酸乙酯溶解后，再依次使用KHCO₃溶液和NaCl溶液清洗，有机相使用无水Na₂SO₄干燥，过滤后滤液减压蒸干后加入石油醚重结晶，得到所述Z-pGlu-ONB；

优选地，使用8％～10％的KHCO₃溶液和5％～10％的NaCl溶液清洗，优选使用10％的KHCO₃溶液和10％的NaCl溶液；

优选地，所述干燥的时间为8～24小时。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，取Z-pGlu和HONB加入二氧六环和四氢呋喃混合溶解后在0～5℃条件下加入活化剂进行活化酯反应，反应后过滤，固体用四氢呋喃清洗，将清洗液合并滤液减压浓缩至干，得到反应产物；

优选地，所述活化剂包括DCCI；

优选地，所述活化酯反应的时间为3～5小时，温度为2～10℃。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备Z-pGlu-His-OH的步骤包括：

将Z-pGlu-ONB的乙腈溶液与L-His-OK的水溶液混合后搅拌，TLC监控Z-pLGlu-ONB点消失后减压浓缩，在0～5℃条件下调节pH至5.5～6.5然后静置8～24小时后过滤，固体去除Cl^-及His后干燥，得到所述Z-pGlu-His-OH。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述搅拌的温度为25～35℃，时间为20～25小时；

优选地，所述减压浓缩的压力为-0.09～-0.1MPa，温度为35～45℃；

优选地，使用1.5～2.5mol/L的HCl调节pH；

优选地，所述静置的温度为2～10℃；

优选地，通过冰纯化水洗涤去除Cl^-及His。