[发明专利]单细胞分离器及其在分离单细胞过程中的应用和单克隆细胞制备方法

说明书

本发明提供了一种单细胞分离器及其在分离单细胞过程中的应用和单克隆细胞制备方法，涉及单细胞分离技术领域。所述单细胞分离器包括移液针头和吸液装置，所述移液针头与吸液装置紧密且无泄漏连通，所述移液针头包括距离针口0.5～1cm处呈75～90°弯曲的静脉注射针头。使用本发明提供的单细胞分离器可以快速的从细胞液中对单细胞进行分离提取，有效缓解了现有单细胞分离方法中有限稀释法操作繁复以及流式细胞仪方法对设备要求高的问题。

技术领域

本发明涉及单细胞分离技术领域，尤其是涉及一种单细胞分离器及其在分离单细胞过程中的应用和单克隆细胞制备方法。

背景技术

群体细胞中，由于细胞与细胞之间存在异质性，即使不同代次的同一细胞系或相同代次的不同细胞株之间的细胞对于病毒的敏感性、病毒粒子包装的完整性或病毒制备的有效性均会出现差异性。因此，单细胞分离对克服细胞异质性有着十分重要的意义。另外，对于细胞转染、感染等试验来说，选取单个细胞对于建立特定基因或表达特定蛋白的克隆来说更是十分必要的。因为只有单一基因的细胞群才能最大限度的保持种群稳定性。为了将高产优质的细胞从细胞群体中筛选出来，通常会进行细胞的单克隆筛选，将高产优质的单个细胞从细胞群体中筛选出来，进行扩繁，建立细胞库，从事生物制品生产使用。

目前，主要通过有限稀释法或流式细胞仪等方法从群体细胞中实现单细胞的分离。有限稀释法是最为常用的单细胞克隆方法，其操作步骤是将细胞悬液计数后进行梯度稀释接种至96孔板。实际操作中，该方法效率不高，一般单细胞收获效率在20％左右，大量存在空白孔和多细胞孔，需要进行2-3次克隆才能确保细胞的单克隆性。因此，有限稀释法工作量大、消耗时间长。而流式细胞仪虽可自动进行单细胞筛选，但仪器设备价格昂贵，难以普及，且在筛选细胞过程中加入一些化学物质，对分离后的细胞生长可能会造成一些化学性影响。

因此，研究开发出一种简单、高效的单细胞分离器，提高单细胞分离的成功率和分离效率，以缓解现有单细胞分离方法存在的问题，变得十分必要和迫切。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种单细胞分离器，所述单细胞分离器可以快速的从细胞液中对单细胞进行分离提取，有效缓解了现有单细胞分离方法中有限稀释法操作复杂以及流式细胞仪方法对设备要求高的问题。

本发明的第二目的在于提供一种上述单细胞分离器在分离单细胞过程中的应用。

本发明的第三目的在于提供一种单克隆细胞制备方法。

本发明提供的一种单细胞分离器，所述单细胞分离器包括移液针头和吸液装置。

所述移液针头与吸液装置紧密且无泄漏连通，所述移液针头包括距离针口0.5～1cm处呈75～90°弯曲的静脉注射针头。

进一步的，所述吸液装置包括10ul、20ul、30ul、100ul或200ul中的一种，优选为20ul的移液器。优选地，所述吸液装置为20ul的移液器。

进一步的，所述移液针头包括距离针口0.8～1cm处呈85～90°弯曲的静脉注射针头。

更进一步的，所述移液针头为距离针口0.8cm处呈90°弯曲的静脉注射针头。

进一步的，所述移液针头的针口为平口。

本发明提供的一种上述单细胞分离器在分离单细胞过程中的应用。

进一步的，所述单细胞包括贴壁细胞和/或悬浮细胞。

本发明提供的一种单克隆细胞制备方法，所述方法包括以下步骤：

提供含悬浮细胞的细胞液，随后在显微镜下，利用上述单细胞分离器对细胞液中的单细胞进行吸取，随后对单细胞进行培养，得到单克隆细胞；