[发明专利]单克隆细胞培养基、应用及培养单克隆细胞的方法

说明书

本发明提供了一种单克隆细胞培养基、应用及培养单克隆细胞的方法，涉及细胞培养技术领域，本发明提供的单克隆细胞培养基，包括基础培养基和条件培养基，对贴壁细胞和悬浮细胞均适用。通过基础培养基和条件培养基的配合使用，使得本发明提供的单克隆细胞培养基具有丰富的营养物质，在单克隆细胞生长期间不需要反复换液直至单细胞克隆集落形成，一方面避免了因换液带来的污染风险，另一方面也缩短了单克隆细胞集落的时间，同时提高了单克隆细胞的成活率。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其是涉及一种单克隆细胞培养基、应用及培养单克隆细胞的方法。

背景技术

群体细胞中，由于细胞与细胞之间存在异质性，即使不同代次的同一细胞系或相同代次的不同细胞株之间的细胞对于病毒的敏感性、病毒粒子包装的完整性或病毒制备的有效性均会出现差异性。为了将高产优质的细胞从细胞群体中筛选出来，通常会进行群体细胞的单克隆筛选，将高产优质的单细胞从细胞群体中筛选出来，进行扩繁，建立细胞库，从事生物制品生产使用。但分离出的单个细胞因密度极低，缺乏群体细胞释放的代谢产物、调控因子和可扩散性信号，所以存活性很低，多数研究也表明，悬浮细胞单克隆培养比贴壁细胞单克隆培养效率更低，有些细胞能低2－3个数量级。

目前，对分离出的单个细胞多采用一周换一次液的做法，来弥补丢失掉的不稳定营养物质(如谷氨酰胺)，以及补充降解的生长因子。但换液的同时不仅增加了污染的风险，同时形成的单克隆细胞集落时间极长(一般需要2周左右)，单克隆细胞成活率也极低(40％左右)。

对于长期从事生物制品研发者来说，如果能找到一种操作简便且能使单细胞成活率高的试验方法，将对今后开展实验室研究工作十分有利。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种单克隆细胞培养基，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。

本发明的第二个目的在于提供上述单克隆细胞培养基的应用。

本发明的第三个目的在于提供一种培养单克隆细胞的方法。

本发明提供了一种单克隆细胞培养基，所述单克隆细胞培养基包括基础培养基和条件培养基；

所述条件培养基包括经冻融及离心处理的同源细胞系的培养基。

进一步的，所述冻融包括在-25～-15℃温度下反复冻融；

优选地，所述冻融包括在-20℃温度下反复冻融2次；

优选地，所述离心的条件包括在800～1200r/min条件下离心8～12min；

优选地，所述离心的条件包括在1000r/min条件下离心10min。

进一步的，所述同源细胞系的培养基包括处于对数生长晚期的同源细胞系的培养基。

进一步的，在冻融和离心处理后还包括除菌的步骤；

优选地，采用过滤的方式进行除菌。

进一步的，所述基础培养基包括基本培养基、白蛋白、生长因子和激素。

进一步的，所述基本培养基包括DMEM或MEM；

优选地，所述白蛋白包括胎牛血清白蛋白或转铁蛋白；

优选地，所述生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子和/或表皮生长因子；

优选地，所述激素包括地塞米松、氢化可的松或胰岛素中的一种或多种；

优选地，所述基础培养基包括含有8％～12％(w/w)胎牛血清白蛋白、10-20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子和3-10μg/ml地塞米松的DMEM；