[发明专利]一种用于治疗大骨缺损的骨修复材料及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于治疗大骨缺损的骨修复材料的制备方法，其特征在于，包括：

1)将脱钙骨基质支架浸泡于Biotin-sulfo-LC-LC-NHS一定时间，冲洗并消毒后洗净得生物素化的脱钙骨基质支架；

2)向重组人IL-4蛋白溶液中加入Sulfo-NHS-Biotin粉末，室温下进行蛋白生物素化，透析并无菌过滤后得到生物素化的IL-4溶液；

3)先将生物素化的脱钙骨基质支架浸泡于亲和素溶液中，取出并冲洗后，再将生物素化的脱钙骨基质支架浸泡于生物素化的IL-4溶液中，一定时间后冲洗，即得与IL-4蛋白偶联的脱钙骨基质支架；

4)将所述与IL-4蛋白偶联的脱钙骨基质支架浸泡于含有重组人IFN-γ蛋白的海藻酸钠溶液中，一定时间后，再将与IL-4蛋白偶联的脱钙骨基质支架转移到氧化钙溶液中浸泡，重复若干次，至支架表面有浅白色絮状物附着，然后以去离子水洗净后，即得骨修复材料。

2.如权利要求1所述的骨修复材料的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述脱钙骨基质支架是通过包括下述步骤的方法制备得到的：

取猪胫骨或股骨近远端松质骨块，将所述松质骨块投入0.6M盐酸的密闭玻璃容器中，常温浸泡24小时，每8小时更换一次盐酸，直到皮质骨呈半透明能弯曲的弹性状态，松质骨块呈海绵状压缩后自动恢复原状时，将所述松质骨块取出，以无菌蒸馏水反复冲洗、浸泡，直至PH值为7得到脱钙骨基质支架。

3.如权利要求1所述的骨修复材料的制备方法，其特征在于，步骤1)中Biotin-sulfo-LC-LC-NHS浓度为10mM；优选地，所述消毒是以70％乙醇溶液浸泡10分钟；所述冲洗和洗净通过PBS冲洗实现的。

4.如权利要求1所述的骨修复材料的制备方法，其特征在于，步骤2)中Sulfo-NHS-Biotin的终浓度为10mM；优选地，所述透析是在PBS中进行的。

5.如权利要求2所述的骨修复材料的制备方法，其特征在于，所述亲和素溶液的浓度为100-250μg/ml。

6.如权利要求1所述的骨修复材料的制备方法，其特征在于，步骤4)中IFN-γ浓度1-2mg/ml，海藻酸钠浓度60-90mg/ml。

7.如权利要妹1所述的骨修复材料的制备方法，其特征在于，氯化钙溶液浓度为10.1mg/ml。

8.如权利要求1所述的骨修复材料的制备方法，其特征在于，步骤4)中，将所述与IL-4蛋白偶联的脱钙骨基质支架浸泡于含有重组人IFN-γ蛋白的海藻酸钠溶液中30min后，再将与IL-4蛋白偶联的脱钙骨基质支架转移到氧化钙溶液中浸泡10min，重复3次。

9.如权利要求1-8中任一项所述的制备方法制备得到的用于治疗大骨缺损的骨修复材料。

10.如权利要求8所述的骨修复材料在制备用于治疗大段骨缺损的材料中的应用。