[发明专利]高粱耐盐碱胁迫基因、检测引物组和试剂盒及应用

说明书

本发明提供了一个高粱耐盐碱胁迫基因、检测引物组和试剂盒及应用，涉及基因检测和功能研究技术领域。本发明所述基因直接参与并提高高粱对盐碱胁迫的耐受性，在耐盐碱胁迫高粱品种和不耐盐碱胁迫高粱品种中，所述基因特异性表达，表达量呈现极显著差异，可依据所述基因在不同高粱品种中的表达量判断高粱对于盐碱胁迫的耐受性，所以可将所述基因用于检测高粱的耐盐碱胁迫性状和选育耐盐碱胁迫高粱新品种和种质。

技术领域

本发明属于基因检测和功能研究技术领域，具体涉及高粱耐盐碱胁迫基因、检测引物组和试剂盒及应用。

背景技术

高粱(Sorghum bicolor(L.)Moench)是全球第五大禾谷类作物，是一种重要的粮食、饲料、能源等多功能C4作物，光合作用效率高，生物产量大，同时高粱抗旱性强、耐盐碱、产量高、适应性广，适合我国中低产田开发利用，尤其是我国高粱多种植在一些种植条件不良的地区，如干旱、半干旱、低洼易涝和盐碱地、土壤贫瘠山区和半山区种植。这就导致高粱产量降低，目前为解决这一困境，多利用生物有机肥或其他的一些土壤改良手段来提高土壤的营养含量和改造为宜种环境，但效果并不显著。

随着高粱基因组测序的完成，覆盖高粱全基因组的高密度遗传连锁图谱构建也日趋完善，基因功能鉴定以及遗传转化的研究亦取得了长足的进展。这对于高粱抗逆品种资源开发利用、抗性机制的研究、重要性状基因的克隆、分子标记辅助选择育种奠定了基础。但是依然鲜有关于高粱耐盐碱胁迫能力相关性状和基因的研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一个高粱耐盐碱胁迫基因，所述基因参与并提高高粱对盐碱胁迫的耐受性，在耐盐碱胁迫高粱品种和不耐盐碱胁迫高粱品种中，所述基因特异性差异表达，可利用所述基因进行耐盐碱胁迫高粱新品种或种质的选育和改良。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一个高粱耐盐碱胁迫基因，所述基因的cDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一组检测高粱耐盐碱胁迫基因的引物组，所述引物组包括引物F和引物R，所述引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物R的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

本发明还提供了一种检测高粱耐盐碱胁迫性状的试剂盒，所述试剂盒中包括上述引物组和内参基因。

优选的，所述内参基因包括GAPDH和/或Actin；所述GAPDH包括GAPDH-F和GAPDH-R，所述GAPDH-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述GAPDH-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述Actin包括Actin-F和Actin-R，所述Actin-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述Actin-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

本发明还提供了一种检测高粱耐盐碱胁迫性状的方法，包括以下步骤：分别以所述试剂盒中的引物组和内参基因为引物，以高粱RNA反转录后得到的第一链cDNA为模板，进行qRT-PCR。

优选的，所述高粱RNA提取自高粱叶片。

优选的，所述qRT-PCR的体系以20μL计，包括：F引物0.4μL，R引物0.4μL，2×TransStart Top Green qPCR SuperMix 10μL，模板2μL和余量的ddH₂O。

优选的，所述qRT-PCR的程序包括：94℃预变性2min；94℃变性5s，60℃退火15s，72℃延伸10s，45个循环。

本发明还提供了所述引物组或所述试剂盒在筛选耐盐碱胁迫高粱种质中的应用。

本发明还提供了所述引物组或所述试剂盒在选育耐盐碱胁迫高粱新品种中的应用。