[发明专利]猪冷冻精液基础稀释液及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种猪冷冻精液冻存液，其特征在于，该猪冷冻精液冻存液包括猪冷冻精液基础稀释液和以体积分数计的，20％新鲜卵黄、1×10⁶IU/L青霉素、1×10⁶IU/L链霉素和3％-4％甘油和1％-2％Equex.STM：所述猪冷冻精液基础稀释液包括：葡萄糖15.98±0.5g/L、柠檬酸19.67±0.5g/L、胆固醇4.83±0.2g/L、L-脯氨酸3.45±0.2g/L、Tris 35.2±0.5g/L和双蒸馏水1L；该猪冷冻精液冻存液的制备方法为：首先称取葡萄糖、柠檬酸、Tris，猪肝脏来源胆固醇、L-脯氨酸，双蒸馏水，将它们放入烧杯内混合，加热，使上述物质完全溶解并降温后，再取该稀释液加入新鲜卵黄、青霉素、链霉素，混匀后降温，静置沉淀存放,取上清液离心后，去掉离心后稀释液的表面油膜并加入甘油、Equex.STM抗冻剂。

2.一种猪保鲜精稀释液中，其特征在于，该猪保鲜精稀释液包括猪冷冻精液基础稀释液和等渗脱脂牛奶；所述猪冷冻精液基础稀释液包括：葡萄糖15.98±0.5g/L、柠檬酸19.67±0.5g/L、胆固醇4.83±0.2g/L、L-脯氨酸3.45±0.2g/L、Tris 35.2±0.5g/L和双蒸馏水1L；所述猪保鲜精稀释液的制备方法为：称取葡萄糖、柠檬酸、Tris，猪肝脏来源胆固醇、L-脯氨酸、双蒸馏水，放入烧杯内混合，加热至98℃，使上述物质完全溶解并降温至35℃后与等渗脱脂牛奶体积比1:1混合，再利用0.22um的滤菌膜过滤，即制成猪保鲜精稀释液。

3.一种猪冷冻精液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采精：采取猪中段精液并用滤纸过滤；采精的同时进行密度测定，原精密度小于1亿/ml的精液直接淘汰，大于1亿/ml的精液进行稀释调整；

(2)稀释：步骤(1)采取的精液与权利要求2所述的猪保鲜精稀释液体积比1：1混合，后于17℃平衡；

(3)离心悬浮：将步骤(2)得到的混合精液稀释液进行离心，弃上清，再往沉淀里加入权利要求1所述的猪冷冻精液冻存液，静置10-15min，使活力较好的精子上浮，以进一步淘汰活力不好的精子和死精；离心条件为：转速为1850rpm，时间为10min；

(4)灌装；

(5)冷藏平衡：灌装后的精液放入4℃平衡柜内平衡3-4h，以增加其稳定性，为冷冻做准备；

(6)冷冻：平衡结束后，先测活力，然后进行冷冻，使用冷冻曲线冷冻；所述冷冻曲线为开始温度5℃200秒，-6℃60秒，-100℃160秒，-140℃80秒，-140℃180秒。

4.一种猪冷冻精液的解冻方法，其特征在于，该解冻方法中，将由权利要求3所述的制备方法制得的猪冷冻精液于37℃下水浴20s，之后孵育10min，再检测解冻后的精子活力。

5.权利要求1所述的猪冷冻精液冻存液或权利要求2所述的猪保鲜精稀释液在制备地方品种猪的冷冻精液中的应用。