[发明专利]一种高灵敏度的cTnI检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种cTnI检测试剂盒，其特征在于，由受体微球-抗体复合物、供体微球-亲和素复合物、生物素化抗体复合物、试剂保存缓冲液组成。

2.如权利要求1所述的cTnI检测试剂盒，其特征在于，所述受体微球-抗体复合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)受体微球前处理：吸取质量浓度为10mg/mL的微球混悬液，置于高速离心机中，离心去上清；添加2倍微球悬浊液体积的纯化水；超声混匀清洗，高速离心去上清；接着用0.05MPH5.0 MES缓冲液悬浮至10mg/mL备用；

(2)将步骤(1)中的微球按照微球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺按质量比为2：1：1的方式混合，并用所述MES缓冲液将微球悬浮至5mg/mL，30℃旋转反应30min，纯化水清洗两次；用0.05M PH8.0HEPES缓冲液，悬浮至10mg/mL备用；

(3)将步骤(2)中的微球与受体微球标记相应受体微球标记抗体以20：1的质量比混合并用所述HEPES缓冲液悬浮微球至5mg/mL，在避光条件下30℃旋转孵育2h，后加入0.01％BSA再孵育30min，离心去上清，用PBST(PH 7.4,0.5％吐温20)清洗两次，用0.05M PH7.4TRIS缓冲液悬浮至20mg/mL于2-8℃保存备用。

3.如权利要求2所述的cTnI检测试剂盒，其特征在于，所述受体微球-抗体复合物的制备方法的步骤(1)中的高速离心的具体操作为于12000rpm的转速下离心20min。

4.如权利要求1所述的cTnI检测试剂盒，其特征在于，所述供体微球-亲和素复合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)供体微球前处理：吸取质量浓度为10mg/mL的微球混悬液于高速离心机中，离心去上清；添加2倍微球悬浊液体积的纯化水；超声混匀清洗，高速离心去上清；接着用0.05MPH5.0 MES缓冲液悬浮至10mg/mL备用；

(2)将步骤(1)中微球按照微球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺按照质量比为2:1:1的方式混合并用MES缓冲液将微球悬浮至5mg/ml，30℃旋转反应30min，纯化水清洗两次；用0.05M PH 9.0Na₂HPO₄缓冲液悬浮至10mg/mL备用；

(3)将步骤(2)中的微球与链霉亲和素以20:1的质量比混合，并用所述Na₂HPO₄缓冲液悬浮微球至5mg/mL，在避光条件下30℃旋转孵育4h，后加入0.01％BSA再孵育30min，离心去上清，用PBST(PH 7.4,0.5％吐温20)清洗两次，用0.05M PH 7.4TRIS缓冲液悬浮至20mg/mL于2-8℃保存备用。

5.如权利要求4所述的cTnI检测试剂盒，其特征在于，所述供体微球-亲和素复合物的制备方法中步骤(1)的高速离心具体操作为于12000rpm的转速下离心20min。

6.如权利要求1所述的cTnI检测试剂盒，其特征在于，所述生物素化抗体复合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)生物素准备：将购置的生物素冻干粉用DMSO复溶至1mg/mL；

(2)将所述受体微球标记抗体、生物素按照质量比为20：1的方式加入0.01M PH7.4的PBS缓冲液中，于25℃旋转孵育2h；将孵育好的抗体生物素溶液用0.01M PH7.4的PBS缓冲液在2-8℃下透析4h，重复透析3次，最终将生物素化抗体复合物保存至2-8℃备用，生物素抗体复合物终浓度为0.4mg/mL。

7.如权利要求1所述的cTnI检测试剂盒，其特征在于，所述试剂保存缓冲液用于保存所述受体微球-抗体复合物、供体微球-亲和素复合物、生物素化抗体复合物。