[发明专利]一种高灵敏度的cTnI检测方法及其试剂盒

说明书

本发明属于cTnI检测方法技术领域，具体涉及一种高灵敏度的cTnI检测方法及其试剂盒。本发明提供的检测方法，利用均相化学发光平台技术引入柠檬酸三钠、乙二胺四乙酸(EDTA)等解离剂，将cTnI‑cTnC二聚体解离成单个cTnI，保证检测样本中的cTnI均为游离状态，表位暴露完全，降低假阴性风险；使得样本中cTnI含量升高；从而提高检测灵敏度。与传统方法相比，本发明提供的检测方法免疫反应时间短，仪器要求低，试剂灵活性强，有利于产品的运输、保存及操作。

技术领域

本发明属于cTnI检测方法技术领域，具体涉及一种高灵敏度的cTnI检测方法及其试剂盒。

背景技术

目前cTnI常用的检测技术有：胶体金法、酶联免疫法(ELISA)、荧光免疫层析、化学发光法等。胶体金法是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PNA、ConA等；ELISA已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术；荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术，以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动；化学发光法是利用化学发光测定化学发光反应反应物、催化剂、增敏剂、抑制剂，偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂的方法。

由于cTnI检测存在多种影响因素，从而造成不同平台的试剂检测灵敏度参差不齐，时有漏检情况出现；

(1)cTnI稳定性差：研究发现,cTnI较不稳定，易受蛋白水解酶作用,且不同部分受影响的程度有差别，N端和C端易被降解；

(2)cTnI存在形式多样：游离或结合形式存在的cTnI，其抗原表位的空间构象可能会有不同，当待测样本中的cTnI存在的形式为结合形式时，cTnI表位易被遮挡，从而使得样本中可被检测到的cTnI浓度降低(cTnI多以结合形式为主，90％以上是cTnI-cTnC二聚体)；

传统的化学发光法是灵敏度相对较高的，它克服了信号上的干扰及手工操作的影响因素而大大提高了检测灵敏度，但仍然存在洗涤分离等多步骤，从而造成检测时间长，无法满足快速检测的需求，而对于现阶段cTnI超敏需求，检测灵敏度仍然需要提升。

发明内容

针对现有技术普遍存在的缺陷，本发明提供了一种高灵敏度的cTnI检测方法及其试剂盒。本发明提供的检测方法，引入了解离试剂，使得样本中cTnI含量升高，可保证检测样本中的cTnI均为游离状态，表位暴露完全，降低假阴性风险，提高检测灵敏度。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种cTnI检测试剂盒，由受体微球-抗体复合物、供体微球-亲和素复合物、生物素化抗体复合物、试剂保存缓冲液组成。

优选地，所述受体微球-抗体复合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)受体微球前处理：吸取质量浓度为10mg/mL的微球混悬液，置于高速离心机中，离心去上清；添加2倍微球悬浊液体积的纯化水；超声混匀清洗，高速离心去上清；接着用0.05M PH5.0 MES缓冲液悬浮至10mg/mL备用；

(2)将步骤(1)中的微球按照微球、EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)、NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)质量比为2：1：1的方式混合，并用所述MES缓冲液将微球悬浮至5mg/mL，30℃旋转反应30min，纯化水清洗两次；用0.05M PH 8.0HEPES缓冲液，悬浮至10mg/mL备用；