[发明专利]一种肝脏组织消化组合物、消化液体系及其应用

权利要求书

1.一种肝脏组织消化液体系，其特征在于：所述消化液体系由消化液I和消化液II组成，所述消化液I由以下终浓度的组分组成：四型胶原酶0.3-0.9mg/ml、金属盐1.0-15.0mg/ml，溶剂为Krebs-Ringer缓冲液；所述消化液II由以下终浓度的组分组成：DNA酶0.05-0.15μg/ml、中性蛋白酶100-200μg/ml，胎牛血清体积分数0.5-2.5%，Liberase酶0.1-2 U/ml，溶剂为含钙镁的Hbss缓冲液。

2.根据权利要求1所述的一种肝脏组织消化液体系，其特征在于：所述金属盐包括钾、钠、镁、钙、铁、锌的氯化物或硝酸盐中的至少一种。

3.根据权利要求1或2所述的一种肝脏组织消化液体系，其特征在于：所述金属盐为氯化钙和氯化锌，并且氯化钙和氯化锌在消化液I中的终浓度分别为1-10mM和0.2-2mM。

4.一种肝脏组织的消化方法，其特征在于：是采用权利要求1~3任意一项所述的消化液体系，该方法包括以下步骤：

1）将肝脏组织剪成碎片并冲洗干净，再在碎片中加入消化液I，混合均匀后进行一次消化，之后加入Hbss缓冲液混匀，静置后去上清；

2）在步骤1）获得的组织沉淀中加入消化液II，混合均匀后进行二次消化，之后加入Hbss缓冲液混匀，静置后收集上清，并将组织沉淀再用Hbss缓冲液处理数次，每次收集上清，最后合并步骤2）的所有上清液；

3）将步骤2）获得的上清液过滤，收集滤液，离心后收集细胞。

5.根据权利要求4所述的一种肝脏组织的消化方法，其特征在于：所述步骤3）中上清液过滤先采用100µm滤网，收集滤液后再过40µm滤网，并收集滤网上截留的细胞。

6.权利要求1~3任意一项所述的消化液体系、权利要求4或5所述的肝脏组织的消化方法在肝脏组织类器官培养中的应用。