[发明专利]含有变异猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组腺相关病毒转移载体、病毒及其制备和应用

权利要求书

1.一种含有变异流行猪伪狂犬病毒gD蛋白基因的重组腺相关病毒转移载体，其特征在于，该载体为重组腺相关病毒载体，其为将变异流行猪伪狂犬病毒的gD蛋白基因插入到重组腺相关病毒转移载体两端ITR序列之间的编码区而得到的重组腺相关病毒转移载体；

所述gD蛋白基因为由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；

所述重组腺相关病毒转移载体为血清型AAV2/9型的重组腺相关病毒转移载体。

2.如权利要求1所述的重组腺相关病毒转移载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）以流行变异毒株的基因组DNA为模板，PCR扩增得到gD蛋白基因片段；

（2）将重组腺相关病毒载体进行双酶切，用胶回收试剂盒回收目标载体片段后定量，记为线性载体片段；

（3）将所述gD蛋白基因片段和线性载体片段进行重组反应，构建出所述含有变异猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组腺相关病毒转移载体；所述gD蛋白基因为由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述重组腺相关病毒转移载体为血清型AAV2/9型的重组腺相关病毒转移载体。

3.一种能够表达猪伪狂犬病毒gD蛋白的重组腺相关病毒，其特征在于，其为将变异猪伪狂犬病病毒gD蛋白抗原基因插入到腺相关病毒载体中形成的重组腺相关病毒；所述gD蛋白抗原基因为由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述腺相关病毒载体的血清型为AAV2/9型。

4.如权利要求3所述的重组腺相关病毒，其特征在于，该病毒基因组中包含CMV启动子序列。

5.如权利要求3或4所述的重组腺相关病毒在制备变异猪伪狂犬病病毒疫苗中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述重组腺相关病毒被制备为肌肉注射剂。

7.一种制备如权利要求3或4所述的重组腺相关病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将如权利要求1所述的重组腺相关病毒转移载体与骨架质粒共转染入宿主细胞；

（2）培养步骤（1）所述宿主细胞；

（3）收获从步骤（2）所述细胞中包装的重组腺相关病毒；

（4）对步骤（3）中的重组腺相关病毒进行纯化。