[发明专利]一种具有增强子功能的落叶松DNA分子、获取及鉴定方法

权利要求书

1.一种具有增强子功能的落叶松DNA分子，DNA序列如SEQ ID NO.1。

2.权利要求1所述的具有增强子功能的落叶松DNA分子的获取方法，其特征在于：包括如下步骤：用特异引物以日本落叶松的基因组DNA为模板，扩增得到574bp的扩增产物，即得所述的具有增强子功能的落叶松DNA分子。

3.根据权利要求2所述的具有增强子功能的落叶松DNA分子的获取方法，其特征在于：所述特异引物序列如下：

正向：5’-ggaatatgattaaagataagcggtcacacccttacaaaac-3’；

反向：5’-ctgtcaaacactgatagtttacaagtggaaagctaatgttct-3’。

4.权利要求1所述的具有增强子功能的落叶松DNA分子的获取方法，其特征在于：落叶松RNA-seq：将落叶松针叶和落叶松愈伤组织分别进行转录组测序，对转录本进行注释；ATAC-seq：将诱导培养的落叶松愈伤组织进行ATAC-seq测序，确定开放染色质信息；组蛋白ChIP-seq：将诱导培养的落叶松愈伤组织进行H3K27ac ChIP-seq测序，明确H3K27ac的分布特征，整合组学分析结果，预测落叶松中增强子，综合测序数据，通过拼装获得落叶松序列SEQ ID NO.2，该序列中包括一个转录本，增强子位于开放染色质区域，并且与H3K27ac富集相关，能够激活远端基因的表达，将该转录本远端具有开放染色质特征和H3K27ac显著富集的序列扩增，最终获得SEQ ID NO.1。

5.权利要求1所述的具有增强子功能的落叶松DNA分子的鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将增强子DNA序列SEQ ID NO.1插入mini35s启动GFP载体中，构建LkENH2增强子载体；

(2)正对照载体采用CaMV35S-GFP，mini35s启动GFP载体为负对照；

(3)落叶松原生质体的制备与转化；

(4)转化后对增强子活性进行荧光验证。

6.根据权利要求5所述的具有增强子功能的落叶松DNA分子的鉴定方法，其特征在于：所述载体的构建方法：使用限制性内切酶SacI将mini35s启动GFP载体线性化，后用无缝连接试剂盒将其与增强子序列片段连接，转化至大肠杆菌DH5α中，筛选阳性转化子，得到LkENH2增强子载体。