[发明专利]新流法腺四联病毒样颗粒及其制备方法和应用

说明书

新流法腺四联病毒样颗粒及其制备方法和应用，属于四联疫苗研发领域，制备方法包括：目的基因的优化及合成、重组穿梭质粒的构建、重组杆粒的构建、重组杆状病毒的拯救、嵌合病毒样颗粒的制备及纯化，最终获得嵌合病毒样颗粒NDV‑AIV‑IBDV‑FAdV4 cVLPs。通过本发明的制备方法制备的新流法腺四联病毒样颗粒具有以下优点：该新流法腺四联病毒样颗粒能够重复高密度的展现外源抗原，具有较强的免疫原性；同时不含有病毒核酸，绿色、安全，有利于新流法腺的净化，符合现代绿色、安全的养殖理念；疫苗种毒与流行毒株匹配；一针多防，简化疫苗免疫程序，避免了多种疫苗的相互干扰；适合大规模悬浮培养及批量生产。

技术领域

本发明属于四联疫苗研发技术领域，具体涉及一种新流法腺四联病毒样颗 粒及其制备方法和应用。

背景技术

新城疫(Newcastle disease，ND)、禽流感(Avine influenza，AI)、传染性 法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)和禽4型腺病毒病(Fowl adenovirus， FAd)是目前危害国内家禽养殖业的主要动物疫病，造成的经济损失非常严重。 根据近期分子流行病学调查数据报道，新城疫在我国的主要流行毒株为基因V II 型，而主要疫苗株为基因II型LaSota弱毒株，基因型的不匹配和活疫苗的不安 全性导致新城疫的净化困难重重。禽流感血清学调查结果表明H9N2亚型分离 率位于AIV各亚型之首，自2003年起农业部指定研制并批准了禽流感灭活疫苗 (如H9亚型：SS株)，但灭活疫苗存在免疫原性不足和无法有效区分疫苗抗体 与野毒感染抗体等局限性。传染性法氏囊病疫苗大多基于经典毒株研制的，对临床流行的超强毒株或变异株感染的鸡不能产生完全保护，并且活疫苗可使法 氏囊组织损伤，导致免疫抑制，造成继发感染和降低其他疫苗的免疫效果等问 题。禽腺病毒病目前缺少血清型匹配的商品疫苗，无法达到控制或净化目的， 并且在规模化养殖方式下，往往不是单独发病，经常并发或继发其他病毒性或 细菌性疾病，导致病情更加复杂。印发的《国家中长期动物疫病防治规划 (2012-2020年)》将新城疫和高致病性禽流感列为国内优先防治的动物疫病， 要求在2020年年底全国达到控制标准，并且全国种鸡场达到净化标准。为贯彻 落实规划，迎合绿色、安全养殖技术理念，简化疫苗免疫程序，以及推动新城 疫、禽流感、法氏囊病和禽腺病毒病的控制和净化，研发一种绿色、安全、高 效、可有效区分疫苗免疫抗体和野毒感染抗体并可“一针多防”的新型疫苗尤 为重要。

新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)的F蛋白参与病毒与宿主细胞 及宿主细胞间融合过程，是重要的保护性抗原。禽流感病毒(Avine influenza virus，AIV)感染是HA结合宿主的细胞受体过程，HA决定着病毒结合宿主受 体特异性，具有亚型特异性和血凝活性，是最重要的抗原基因和毒力基因。传 染性法氏囊病毒(Infectious bursaldisease virus，IBDV)的VP2蛋白是IBDV的 衣壳蛋白和主要保护性抗原，与病毒的毒力、细胞嗜性和抗原变异有关，具有 良好的免疫原性和稳定性。禽4型腺病毒(Fowl adenovirusserotype-4，FAdV-4) 的纤维蛋白Fiber-2是腺病毒连接细胞的受体，决定着毒力的变化和组织取向。 大量国内外表明F蛋白、HA蛋白、VP2蛋白和Fiber-2蛋白具有成为分别预防NDV、AIV、IBDV和FAdV-4的亚单位疫苗的潜力，但如何提高其免疫原性尤 其是诱导细胞免疫应答的能力对预防胞内复制的病毒性疾病至关重要。