[发明专利]一种提高籼稻成熟胚愈伤组织诱导的前处理方法

说明书

本发明属于转基因技术领域，具体提供了一种提高籼稻成熟胚愈伤组织诱导率的前处理方法。去壳的籼稻种子，利用质量浓度为0.5％‑1％的30％三氯异氰尿酸溶液浸泡8‑12h，而后按照传统方法进行种子消毒和接种于诱导培养基，可以在不调整传统诱导培养基配方、激素类型及浓度等条件下，显著提高籼稻种子的出愈率和显著增加愈伤组织的质量，为解决籼稻诱导率比较低提供新的途径。本发明简便易行，不仅节省大量时间和精力，而且也促进遗传转化进程。

技术领域

本发明属于转基因技术领域，具体提供了一种提高籼稻成熟胚愈伤组织诱导的前处理方法。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，维持着世界一半以上人口的生存。近年来，随着世界人口的增加和可耕种面积的减少，提高水稻产量和质量对于解决世界性的粮食危机具有重要意义。分子生物学和分子遗传学的进一步发展，使得转基因技术成为水稻产量提高和质量提升的一个重要工具。组织培养技术是转基因技术的重要组成部分，在水稻遗传转化和品种改良中被广泛应用。水稻遗传转化采用最多的体系为愈伤组织再生系统。粳稻品种愈伤诱导率较高，已经建立了高效的遗传转化体系，转基因育种在粳稻中已取得了可喜的成果；但占水稻品种80％以上的籼稻，由于愈伤组织诱导率低，造成籼稻遗传转化困难，严重制约了转基因技术在籼稻中的应用。

水稻体细胞组织培养是水稻遗传转化的基础技术，在水稻遗传改良中具有重要的作用，因此，建立一个高效再生体系是实现基因遗传转化的先决条件。由于水稻成熟胚具有来源广、取材不受季节和地理环境限制、操作方便、不易污染等优点，水稻成熟胚是进行遗传操作的理想材料，但不同品种水稻的愈伤诱导率差别却很大；即使在理论最优的条件下，许多性状优良的籼稻品种的成熟胚的愈伤组织诱导率依然很低。传统方法上，对水稻成熟胚愈伤组织诱导的改良，往往是通过对培养基改良以及组培的其他方面采取措施来对愈伤组织进行诱导，例如，试用不同培养基、不同激素类型及浓度，在诱导培养基中添加少量激动素以提高愈伤组织的分化质量；加入有机附加物(如水解酪蛋白)以便改善某些品种的愈伤组织质量。然而，前人的研究结果表明，水稻的遗传背景决定了组培中诱导过程，影响水稻愈伤组织诱导的主要因素是水稻品种的基因型。水稻品种资源丰富，具有高水平的遗传多样性，利用传统方法，通过试用不同培养基、不同激素类型及浓度、对培养基改良以及组培的其他方面采取措施来对不同籼稻成熟胚愈伤组织诱导进行改良，不仅费时费力，而且还不一定获得理想结果。

基于此，一种可以广适于籼稻材料的愈伤诱导前处理方法是本领域急需的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，本发明提供了一种可以广适于籼稻材料的愈伤诱导前处理方法。通过本发明的前处理后，可以在不调整传统方法使用的诱导培养基配方、激素类型及浓度条件下，提高籼稻的愈伤组织诱导率。利用本发明的前处理方法，不仅省时省力，而且加快籼稻遗传转化进度。

本发明是通过如下手段实现的：

一种提高籼稻成熟胚愈伤组织诱导的前处理方法，包括：

(1)籼稻成熟胚去壳

选取饱满、无霉变、成熟的籼稻种子。手工或微型脱壳机脱壳，注意保持胚完整。

(2)前处理试剂配制

30％的三氯异氰尿酸复合物和灭菌水，按照质量比配制质量浓度0.5％-1％的三氯异氰尿酸溶液，现配现用。

(3)成熟胚前处理

去壳的水稻种子用清水冲洗干净，无菌水漂洗3-5次。质量浓度0.5％-1％的三氯异氰尿酸溶液于25℃至37℃下浸泡去壳的水稻种子8-12h；无菌水漂洗3-5次，使用无菌滤纸吸干种子。

(4)成熟胚消毒