[发明专利]超临界制备胰酶的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种超临界制备胰酶的方法，其步骤为鲜胰脏绞碎成20~100目，转入超临界萃取釜，超临界二氧化碳为溶剂，丙酮、乙醇为夹带剂，压力20~35Mpa，30~40℃，动态萃取3~5小时，去除胰脏原料中油脂。萃取后的胰脏加2倍水磨浆，按投料重量加0.5%氯化钙、0.5%胰酶，调pH6.5~7.5，10~20℃激活4~12小时，过滤收集胰浆乳悬液，加入冷乙醇至酒精含量60%，0~5℃沉淀，过滤收集沉淀；沉淀脱水干燥、粉碎得到胰酶产品。本发明利用超临界二氧化碳为溶剂，丙酮或乙醇为夹带剂，萃取除去胰脏原料中油脂，避免油脂对胰酶提取影响，更加有效达到激活、提取胰酶目的，工艺简洁容易操作，条件温和，制备出的胰酶酶活力、收率高，提取油脂能够综合利用，产生经济效益，同时降低环境污染。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种超临界制备胰酶的方法。

背景技术

胰酶系各国药典收载的助消化药，是从动物胰脏中提取的多种酶的混合物，主要成分为胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶。胰酶主要用于消化不良，食欲不振及肝、胰腺疾病引起的消化障碍，同时也适用于先天性胰功能不全、腹部手术和外伤胰腺切除导致的胰功能不全。此外，胰酶中含有多种活性物质，可以作为基础原料从中提取多种生化药品，如胰激肽酶原，弹性蛋白酶，门冬酰胺酶，糜蛋白酶，羧肽酶等，此外，胰酶还被广泛用于细胞培养以生产治疗用生物制品如单抗、细胞因子等，具有重大的工业价值。随着胰酶应用越来越广泛，产品质量要求也越来越高。

而现有技术中，胰酶的生产过程包括：胰脏磨浆、激活、低浓度有机溶剂提取、沉淀丙酮脱脂、烘干，由于制造工艺的限制，因为原料中油脂存在，胰酶生产中的激活、提取效果不佳，脱脂过程需要使用大量有机溶剂，对产品酶活产生较大的影响；同时萃取回收油脂利用，可提高经济效益，降低环保压力。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种超临界二氧化碳萃取原料中油脂的胰酶制备方法。

技术方案：本发明提供了一种胰酶的制备方法，包含以下步骤：（1） 鲜胰脏绞碎成20~100目，转入超临界萃取釜，超临界二氧化碳为溶剂，丙酮、乙醇为夹带剂，压力20~35Mpa，30~40℃，动态萃取3~5小时，去除胰脏原料中油脂。（2）萃取后的胰脏加2倍水磨浆，按投料重量加0.5%氯化钙、0.5%胰酶，调pH6.5~7.5，10~20℃激活4~12小时，过滤收集胰浆乳悬液；（3）加入冷乙醇至酒精含量60%，0~5℃沉淀，过滤收集沉淀；（4）沉淀脱水干燥、粉碎得到胰酶产品。本发明利用超临界二氧化碳为溶剂，丙酮或乙醇为夹带剂，萃取除去胰脏原料中油脂，避免油脂对胰酶提取影响，更加有效达到激活、提取胰酶目的，工艺简洁容易操作，条件温和，制备出的胰酶酶活力、收率高，提取油脂能够综合利用，产生经济效益，同时降低环境污染。

优选地，所述胰腺原料为新鲜或解冻后绞碎成20~100目猪胰脏。

优选地，所述溶剂为超临界二氧化碳。

优选地，所述夹带剂为丙酮、乙醇、甲醇、正己烷等有机溶剂。

优选地，所述超临界萃取条件为溶剂和夹带剂用量比为90:10~70:30，压力20~35Mpa，25~35℃，动态萃取3~5小时。

优选地，所述激活提取条件为胰脏萃取后加入2倍pH为3~4的的水溶液磨成胰浆，按投料重量加0.5%氯化钙、0.5%胰酶，调pH6.5~7.5，10~20℃激活4~12小时，过滤收集胰浆乳悬液。

优选地，所述胰酶沉淀的方法是：提取液过滤得到乳悬液，向乳悬液中加入冷乙醇至含75%乙醇浓度，0~5℃沉淀，收集沉淀得到胰酶。

优选地，所述胰酶干燥的条件为 ：维持真空压力500～750mmHg，温度35～45℃，干燥 12～ 24小时。