[发明专利]一种人胎盘间充质干细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种人胎盘间充质干细胞的培养方法，涉及生物科学技术领域，其技术方案要点是：具体包括以下步骤：S1、获得P4代人胎盘间充质干细胞，并进行传代培养；S2、细胞换液，在进行传代培养过程中，每隔2天进行细胞换液；S3、细胞传代冻存，在人胎盘间充质干细胞的融合度达到80‑90％时，对人胎盘间充质干细胞进行传代冻存，其中，在进行冻存时进行细胞计数。利用该人胎盘间充质干细胞的培养方法，能够培养人胎盘间充质干细胞，便于熟练掌握细胞培养的整体流程、复苏、换液、传代及冻存操作；此外，本发明对人胎盘间充质干细胞的培养方法进行优化，采用该方方法来培养人胎盘间充质干细胞的培养成本低，培养操作流程简单可靠。

技术领域

本发明涉及生物科学技术领域，更具体地说，它涉及一种人胎盘间充质干细胞的培养方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)，是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，间充质干细胞具有低免疫原性及向缺血或损伤组织归巢的特征，输入宿主体内后，可归巢于特定部位，在微环境影响下定向分化为内胚层、中胚层以及外胚层3个胚层来源组织的细胞，如骨、软骨、肌腱、脂肪、肝、肾、皮肤、肌肉、神经甚至胰腺等10余种成熟细胞，因而成为再生医学中器官修复的理想种子细胞。

间充质干细胞具有广阔的临床应用前景，可用于治疗神经系统疾病、肝肾损伤、自身免疫疾病、心脏疾病、骨疾病、软骨疾病、缺血性血管疾病、糖尿病并发症和肿瘤等疾病。它们也可用于组织工程和面部整形中。另外，它们也可与造血干细胞共同移植治疗血液疾病。

间充质干细胞有三个主要来源：骨髓、脂肪组织、婴儿出生时娩出的胎盘组织，其中，以胎盘中存量最多。婴儿出生后，留存在胎盘中的间充质干细胞可以提取出来，给孩子长期保存，以备他日不时之需，只是因为对干细胞缺乏了解，这种宝贵的健康资源很多就被丢弃了。胎盘间充质干细胞(mesenchymalstemcell，MSC)是一种多能干细胞，在胚胎发育中来源于中胚层。在机体正常的组织损伤修复过程中，MSC是一种重要的参与组织再生的细胞库。在组织损伤引起的特殊信号作用下，MSC迁移到受损部位，在局部聚集增殖，依据不同的损伤信号沿着不同途径分化。MSC易于分离扩增，体外倍增能力旺盛，即使扩增1亿倍仍能保持其多向分化能力。因此，MSC是一种实用的组织修复种子细胞。

近年来，以胎盘作为间充质干细胞组织来源的研究越来越多。目前胎盘间充质干细胞已被用于治疗造血干细胞移植引发的移植物抗宿主病，并且已被证实十分具有临床应用前景。瑞典科学家对数十名接受异体造血干细胞移植的患者注射了胎盘间充质干细胞，证实了胎盘间充质干细胞移植的安全性；同时，在治疗上，注射胎盘间充质干细胞可以明显提高移植物抗宿主病患者的存活率。总体来说，胎盘间充质干细胞主要有以下几个方面的优势：1)取材方便，原料来源充足，是生命资源的再生。2)分化能力强可以定向诱导分化为间充质干细胞、血管干细胞、上皮干细胞、神经干细胞和肝干细胞等多种干细胞。3)数量充足，使用方便，增殖能力强，培养后数目可达10亿，可以供多人多次使用。4)在人群中使用不需要配型，不会产生免疫排斥反应，同时，血缘关系越亲近，生物利用度会越高，使用的效果越好。5)治疗疾病范围广，抗衰老，恢复健康体态，心脑血管系统疾病，糖尿病，肝肾损伤，脑及脊髓神经损伤，自身免疫性疾病，移植物抗宿主病等多种疾病。

综上所述，间充质干细胞给未来的再生医学带来了新希望,对间充质干细胞更深入的研究和临床应用必将在不远的将来造福人类。因此，本发明旨在设计提供一种人胎盘间充质干细胞的培养方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种人胎盘间充质干细胞的培养方法，利用该人胎盘间充质干细胞的培养方法，能够培养人胎盘间充质干细胞，并在培养过程中观察其生长状态，并对培养的细胞进行传代冻存，从而便于熟练掌握细胞培养的整体流程、复苏、换液、传代及冻存操作；通过该培养方法，便于在培养过程中鉴定胎盘间充质干细胞是否具有间充质干细胞特性的操作；此外，本发明对人胎盘间充质干细胞的培养方法进行优化，采用该方方法来培养人胎盘间充质干细胞的培养成本低，培养操作流程简单可靠。