[发明专利]一种加入臭氧油的脱细胞羊膜水凝胶敷料的制备方法

权利要求书

1.一种加入臭氧油的脱细胞羊膜水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：将从新鲜胎盘上剥离的羊膜组织用PBS溶液洗涤后进行3次冻融循环实验；

S2：将经步骤S1处理之后的羊膜置于网格过滤器中，并在流动的去离子水下揉洗10min，重复该步操作3次；

S3：将经步骤S2处理之后的羊膜浸入胰蛋白酶/EDTA溶液中，置于摇床冲洗1h；

S4：将经步骤S3处理之后的羊膜浸入3％Triton溶液中，并再置于摇床冲洗1h，重复该步操作2次；

S5：将经步骤S4处理之后的羊膜置于网状过滤器中，在流动的去离子水下揉洗10min；

S6：将经步骤S5处理之后的羊膜浸入3％Triton溶液中，并置于摇床中冲洗1h，重复该步操作2次；

S7：将经步骤S6处理之后的羊膜浸入4％脱氧胆酸钠溶液中，并置于摇床冲洗1h，重复该步操作2次；

S8：将经步骤S7处理之后的羊膜浸入0.1％对乙酸/4％乙醇溶液中，并置于摇床中冲洗4h；

S9：将经步骤S8处理之后的羊膜用无菌PBS溶液冲刷15min后，再用无菌去离子水冲洗羊膜15min，重复该步操作2次；之后将羊膜组织放置在-80℃液氮环境下密封储存；

S10：取经步骤S9处理之后的羊膜组织，用冻干机对羊膜组织进行冻干处理，将冻干后的羊膜组织浸入1mg/mL猪胃蛋白酶和0.01N HCl溶液中，置于摇床中，室温下200rpm震荡72h；

S11：向经步骤S10处理之后的样品中加入总体积十分之一的0.1N NaOH及总体积九分之一的10x PBS溶液，将样品的pH值调节至机体生理正常值，最终制得浓度为8mg/mL的脱细胞羊膜水凝胶；

S12：向步骤S11获得的脱细胞羊膜水凝胶中加入臭氧橄榄油，加入方式如下：将橄榄油与浓度为47μg/ml的臭氧按1:1的W/V％比例混合5-10min后，再将臭氧橄榄油混合物加入步骤S11获得的脱细胞羊膜水凝胶中，混合均匀得臭氧油脱细胞羊膜水凝胶敷料；

S13：对步骤S12获得的臭氧油脱细胞羊膜水凝胶敷料进行灭菌处理。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S13的灭菌方式如下：选用钴60辐照灭菌，辐照剂量为11kGy-100kGy。

3.权利要求1-2中任意一项所述的制备方法制备的臭氧油脱细胞羊膜水凝胶敷料。

4.权利要求1-2中任意一项所述的臭氧油脱细胞羊膜水凝胶敷料在制备治疗促进伤口愈合的药物中的应用。