[发明专利]一种加入臭氧油的脱细胞羊膜水凝胶敷料的制备方法

说明书

本发明涉及生物医药材料技术领域，公开了一种加入臭氧油的脱细胞羊膜水凝胶敷料的制备方法；还公开了臭氧油脱细胞羊膜水凝胶敷料；还公开了臭氧油脱细胞羊膜水凝胶敷料在制备治疗促进伤口愈合的药物中的应用。本发明的制备方法新颖独特，制备方法简单，可满足规模生产需求；臭氧油具备良好的杀菌抑菌作用，脱细胞羊膜凝胶可促进伤口愈合，两者结合可有效促进包括慢性难愈性体表伤口的愈合，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药材料技术领域，具体涉及一种加入臭氧油的脱细胞羊膜水凝胶敷料的制备方法。

背景技术

羊膜是一种较易获得的生物材料，羊膜已被发现分泌多种具备生物活性的细胞因子和生长因子，这些生物活性因子被储存在羊膜的基膜之中并随时间分泌。羊膜是从细胞滋养层衍化而来，是两层胎膜的内层。去除细胞后的羊膜细胞外基质材料中含有胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板层体等多种成分，表达多种生长因子及其mRNA的相关蛋白，能为细胞的增殖、分化提供丰富的营养成分，有利于细胞的生长繁殖；羊膜基底膜层较厚，有利于表皮细胞的贴附和迁移，促进上皮化，防止其凋亡；羊膜致密层与海绵层的胶原纤维形成疏松的三维立体构型；组织相容性好，不表达人类白细胞抗原，无诱导排斥反应；容易得到，且可塑性好，易于加工处理。大量研究证实，羊膜拥有的抑制纤维化、抗炎特性以及辅助上皮形成的能力将有助于防止粘连形成和促进损伤组织的愈合，去细胞化的羊膜将消除可能会挂载在羊膜细胞层的免疫反应，提高机体对膜的免疫耐受性。

臭氧是由三个氧原子组成的天然气体分子，不稳定，具有极强的氧化性，被公认为是最好的杀菌剂、抗病毒剂和抗真菌剂之一，臭氧化油比气态或者液态形式的臭氧稳定性好，可长期保存，它作为一种天然的制备物，在很多国家被广泛应用于治疗局部溃疡、细菌、真菌和寄生虫感染。

本发明将臭氧油和脱细胞羊膜结合，以获得一种新的敷料及其制备的方法。

发明内容

基于以上问题，本发明提供一种加入臭氧油的脱细胞羊膜水凝胶敷料的制备方法，本发明制备方法简单，可满足规模生产需求，具有广阔的应用前景。

为解决以上技术问题，本发明提供了一种加入臭氧油的脱细胞羊膜水凝胶敷料的制备方法，包括如下步骤：

S1：将从新鲜胎盘上剥离的羊膜组织用PBS溶液洗涤后进行3次冻融循环实验；

S2：将经步骤S1处理之后的羊膜置于网格过滤器中，并在流动的去离子水下揉洗10min，重复该步操作3次；

S3：将经步骤S2处理之后的羊膜浸入胰蛋白酶/EDTA溶液中，置于摇床冲洗1h；

S4：将经步骤S3处理之后的羊膜浸入3％Triton溶液中，并再置于摇床冲洗1h，重复该步操作2次；

S5：将经步骤S4处理之后的羊膜置于网状过滤器中，在流动的去离子水下揉洗10min；

S6：将经步骤S5处理之后的羊膜浸入3％Triton溶液中，并置于摇床中冲洗1h，重复该步操作2次；

S7：将经步骤S6处理之后的羊膜浸入4％脱氧胆酸钠溶液中，并置于摇床冲洗1h，重复该步操作2次；

S8：将经步骤S7处理之后的羊膜浸入0.1％对乙酸/4％乙醇溶液中，并置于摇床中冲洗4h；

S9：将经步骤S8处理之后的羊膜用无菌PBS溶液冲刷15min后，再用无菌去离子水冲洗羊膜15min，重复该步操作2次；之后将羊膜组织放置在-80℃液氮环境下密封储存；

S10：取经步骤S9处理之后的羊膜组织，用冻干机对羊膜组织进行冻干处理，将冻干后的羊膜组织浸入1mg/mL猪胃蛋白酶和0.01N HCl溶液中，置于摇床中，室温下200rpm震荡72h；