[发明专利]拆分2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯的方法

说明书

本发明公开了一种将(R)‑2‑(苄氧基羰基氨基)‑2‑(氧杂环丁烷‑3‑基)乙酸甲酯转换为(R)‑2‑(苄氧基羰基氨基)‑2‑(氧杂环丁烷‑3‑基)乙酸的酶催化方法以及拆分2‑(苄氧基羰基氨基)‑2‑(氧杂环丁烷‑3‑基)乙酸甲酯的方法。所述酶催化方法中的所述酶包括氨基酸序列如SEQ ID NO:6、7、9和10所示的酶中的一种或多种。发明采用酶催化的拆分方法制得(S)‑2‑(苄氧基羰基氨基)‑2‑(氧杂环丁烷‑3‑基)乙酸甲酯的收率可达30％，且产品ee值高，可达93％以上，经纯化后ee值高达99.5％以上，适合工业化生产。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种非天然氨基酸衍生物的制备方法，特别是一种拆分2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯的方法。

背景技术

甘氨酸类衍生物手性2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯是一种非天然氨基酸，是重要的医药中间体。如WO2014152127A1报道了(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯可以用作二肽或三肽环氧酮蛋白酶抑制剂的中间体；European Journal of Medicinal Chemistry 45,2010,160-170报道了(R)或(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯可以用作HIV-1蛋白酶抑制剂的中间体。

但是目前的制备方法都是得到消旋体2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯，再经拆分制得手性2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯。目前的拆分方法有HPLC分离法，但是拆分效率低下，不适合工业化生产。

如WO2014152127A1上公开的方法为将2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯进行催化加氢可以制得消旋体2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯，后经多步反应制得所需化合物后采用手性HPLC拆分得到所需手性化合物。

如European Journal of Medicinal Chemistry 45,2010,160-170公开的方法为3-氧杂环丁酮和Z-α-膦酰基甘氨酸-三甲酯(Z-α-phosphonoglycine-trimethyl ester)进行Witting-Horner反应得到二脱氢-α-氨基酸甲酯，再经催化加氢，以及Cbz保护可得消旋体2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯，后经HPLC分离得到所需的手性化合物。

另外还有采用手性试剂进行化学拆分的方法，如II Farmaco,2001,56,609–613中公开了可以通过L-(+)-酒石酸或者D-(-)-酒石酸进行消旋体2-氨基-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯拆分的方法，但是拆分产率小于20％。

因此目前需要开发一种高效拆分制得(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为克服现有技术中拆分消旋体2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯的方法中拆分效率低下、不适合工业化生产的缺陷，提供一种非天然氨基酸衍生物的制备方法。本发明采用酶催化的拆分方法制得(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯的收率可达30％，且产品ee值高，可达93％以上，经纯化后ee值高达99.5％以上，适合工业化生产。

底物：化合物I，消旋体2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯，CAS号：1255717-04-4，化合物I结构式如下：

产物1：化合物II(S)-2-(苄氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯，CAS号：1213783-62-0，化合物II结构式如下：